U2OS-CRISPR-TPR-SNAP

Az U2OS-CRISPR-TPR-SNAP egy genomszerkesztett humán osteosarcoma sejtvonal, amely U2OS sejtekből származik, és amelyben az endogén TPR (Translocated Promoter Region) gént CRISPR/Cas9 technológiával módosították, hogy egy in-frame SNAP tagot kódoljon. A TPR egy nagy, spirálszerűen tekeredő nukleoporin, amely a nukleoplasztikus oldalon, a nukleáris pórus komplex (NPC) nukleáris kosarában lokalizálódik. A TPR endogén lókuszának megjelölésével a fúziós fehérje natív szabályozó kontroll alatt expresszálódik, megőrizve a fiziológiai expressziós szinteket és fenntartva a nukleáris kosár szerkezetébe való megfelelő beépülést.

A SNAP tag lehetővé teszi a TPR kovalens jelölését benzilguanin-konjugált fluoreszcens szubsztrátokkal élő vagy fixált sejtekben, ami rendkívül specifikus és stabil vizualizációt tesz lehetővé. Az U2OS-CRISPR-TPR-SNAP sejtekben a jelölt TPR jellegzetes pontszerű, gyűrűszerű eloszlást mutat a nukleáris membránon, ami megfelel az NPC-hez kapcsolódó nukleáris kosárszerkezeteknek. Ez a rendszer kiválóan alkalmas kvantitatív fluoreszcens mikroszkópiára, szuperfelbontású képalkotásra, pulzus-üldözéses jelölésre, valamint a nukleáris kosár szerkezetének és cseréjének dinamikus vizsgálatára. Az U2OS sejtek lapos morfológiája és nagy magjai megkönnyítik a nukleáris membránhoz kapcsolódó struktúrák nagy felbontású képalkotását.

A TPR kritikus szerepet játszik az mRNS exportjában, a nukleáris transzport szabályozásában, a kromatin szerveződésében a nukleáris periférián és a genom térbeli szerveződésében. A TPR részt vesz a nukleáris transzporttal kapcsolatos alkompartmentumok kialakulásában és a heterokromatin kizárásában a nukleáris pórusokkal kapcsolatos régiókból. Az U2OS-CRISPR-TPR-SNAP fiziológiailag releváns modellt nyújt a nukleáris kosár felépítésének és dinamikájának elemzéséhez, a nukleocitoplazmatikus transzportmechanizmusok vizsgálatához, valamint a nukleáris membránhoz kapcsolódó kromatin interakciók endogén expressziós körülmények közötti tanulmányozásához.

37°C, 5%_CO2, párásított légkör.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

A mikoplazma-szennyeződést mind a PCR-alapú vizsgálatokkal, mind a lumineszcencia-alapú mikoplazma-kimutatási módszerekkel kizárják.

A bakteriális, gombás vagy élesztőgombás szennyeződés elkerülése érdekében a sejtkultúrákat napi vizuális ellenőrzésnek vetik alá.

Hosszú távú tartósítás céljából helyezze az üvegeket gőzfázisú folyékony nitrogénbe, körülbelül -150 és -196 °C közötti hőmérsékleten. A -80 °C-on történő tárolás csak rövid átmeneti lépésként fogadható el a folyékony nitrogénbe való átvitel előtt.

A kriokonzervált sejtvonalakat szárazjégen, validált, szigetelt csomagolásban szállítják, elegendő hűtőközeggel, hogy a szállítás során a hőmérsékletet körülbelül -78 °C-on tartsák. Átvételkor azonnal vizsgálja meg a tárolóedényt, és haladéktalanul helyezze át az injekciós üvegeket a megfelelő tárolóhelyre.

A Cytionnál kiállunk termékeink minősége és életképessége mellett. Garantáljuk, hogy sejtjeink a tenyésztés megkezdésekor életképesek lesznek, a létesítményünkből történő kiszállítás után 60 napig. Biztosítjuk, hogy minden anyag megfelel az analitikai tanúsítványban és/vagy a terméklapon leírt specifikációknak

A teljes részleteket lásd <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang="""x-default"">Garancia nyilatkozatunkban