U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup358/RanBP2

Az U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup358/RanBP2 egy genomszerkesztett humán osteosarcoma sejtvonal, amely U2OS sejtekből származik, és amelyben az endogén RANBP2 (más néven NUP358) lókusz CRISPR/Cas9 segítségével módosításra került, hogy a natív fehérjével in-frame SNAPf tagot kódoljon. A Nup358/RanBP2 egy nagy nukleoporin, amely a nukleáris pórus komplex (NPC) citoplazmatikus filamentumaiban lokalizálódik, és kritikus szerepet játszik a nukleocitoplazmatikus transzportban, a SUMOylációban és a mitotikus folyamatokban. Az endogén címkézés biztosítja, hogy a SNAPf-Nup358 fiziológiai promóter kontroll alatt expresszálódjon, fenntartva a natív expressziós szinteket és minimalizálva a túlzott expressziós rendszerekkel kapcsolatos artefaktokat.

A SNAPf tag a SNAP-tag gyors jelölő változata, amely kovalens kötéssel kapcsolódik a benzilguanin-konjugált szubsztrátokhoz, lehetővé téve a Nup358 szelektív és stabil fluoreszcens jelölését élő vagy fixált sejtekben. Az U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup358/RanBP2 sejtekben a fúziós fehérje a citoplazmatikus NPC filamentumokra jellemző pontszerű eloszlásban lokalizálódik a sejtmag membránján. Ez a konfiguráció támogatja a nagy felbontású fluoreszcens képalkotást, a szuperfelbontású mikroszkópiát, a pulzus-üldözéses jelölést és az egyedi molekulák nyomon követését az NPC architektúrájának és dinamikájának tanulmányozása érdekében. Az U2OS sejtek lapos morfológiája és nagy magjai tovább megkönnyítik a magmembrán struktúráinak kvantitatív képalkotását.

Ez a modell lehetővé teszi a Nup358-specifikus szerepek vizsgálatát a CRM1/exportin-függő nukleáris exportban, a Ran GTPáz ciklus szabályozásában és a citoplazmatikus transzportplatformok térbeli szerveződésében. Tekintettel a Nup358 részvételére a mitotikus orsószerkezet összeállításában és a kinetokór funkciójában, a sejtvonal alkalmas a sejtciklus-függő nukleoporinek újraeloszlásának és az NPC szétszerelésének/újraösszeszerelésének vizsgálatára is a mitózis során. Az U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup358/RanBP2 fiziológiailag releváns platformot biztosít az emberi sejtekben található nukleáris pórus komplex citoplazmatikus felületének szerkezeti és funkcionális aspektusainak elemzéséhez.

37°C, 5%_CO2, párásított légkör.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

A mikoplazma-szennyeződést mind a PCR-alapú vizsgálatokkal, mind a lumineszcencia-alapú mikoplazma-kimutatási módszerekkel kizárják.

A bakteriális, gombás vagy élesztőgombás szennyeződés elkerülése érdekében a sejtkultúrákat napi vizuális ellenőrzésnek vetik alá.

Hosszú távú tartósítás céljából helyezze az üvegeket gőzfázisú folyékony nitrogénbe, körülbelül -150 és -196 °C közötti hőmérsékleten. A -80 °C-on történő tárolás csak rövid átmeneti lépésként fogadható el a folyékony nitrogénbe való átvitel előtt.

A kriokonzervált sejtvonalakat szárazjégen, validált, szigetelt csomagolásban szállítják, elegendő hűtőközeggel, hogy a szállítás során a hőmérsékletet körülbelül -78 °C-on tartsák. Átvételkor azonnal vizsgálja meg a tárolóedényt, és haladéktalanul helyezze át az injekciós üvegeket a megfelelő tárolóhelyre.

A Cytionnál kiállunk termékeink minősége és életképessége mellett. Garantáljuk, hogy sejtjeink a tenyésztés megkezdésekor életképesek lesznek, a létesítményünkből történő kiszállítás után 60 napig. Biztosítjuk, hogy minden anyag megfelel az analitikai tanúsítványban és/vagy a terméklapon leírt specifikációknak

A teljes részleteket lásd <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang="""x-default"">Garancia nyilatkozatunkban