U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup358/RanBP2

U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup358/RanBP2 je genomově upravená lidská osteosarkomová buněčná linie odvozená z buněk U2OS, ve které byl endogenní lokus RANBP2 (známý také jako NUP358) modifikován pomocí CRISPR/Cas9 tak, aby kódoval značku SNAPf v rámci nativního proteinu. Nup358/RanBP2 je velký nukleoporin lokalizovaný v cytoplazmatických vláknech jaderného pórového komplexu (NPC) a hraje klíčovou roli v nukleocytoplazmatickém transportu, SUMOylaci a mitotických procesech. Endogenní značení zajišťuje, že SNAPf-Nup358 je exprimován pod fyziologickou kontrolou promotoru, čímž se udržují nativní úrovně exprese a minimalizují artefakty spojené s systémy nadměrné exprese.

Značka SNAPf je variantou značky SNAP s rychlým značením, která se kovalentně váže na substráty konjugované s benzylguaninem, což umožňuje selektivní a stabilní fluorescenční značení Nup358 v živých nebo fixovaných buňkách. V buňkách U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup358/RanBP2 se fúzní protein lokalizuje do jaderné obálky v bodovém rozložení charakteristickém pro cytoplazmatická NPC filamenta. Tato konfigurace podporuje vysoké rozlišení fluorescenčního zobrazování, superrozlišovací mikroskopii, značení pulz-chase a sledování jednotlivých molekul pro studium architektury a dynamiky NPC. Plochá morfologie a velká jádra buněk U2OS dále usnadňují kvantitativní zobrazování struktur jaderné obálky.

Tento model umožňuje zkoumání specifických rolí Nup358 v CRM1/exportin-dependentním jaderném exportu, regulaci cyklu Ran GTPázy a prostorové organizaci cytoplazmatických transportních platforem. Vzhledem k účasti Nup358 na sestavování mitotického vřetena a funkci kinetochoru je tato buněčná linie také vhodná pro studium redistribuce nukleoporinů závislé na buněčném cyklu a rozebírání/sestavování NPC během mitózy. U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup358/RanBP2 poskytuje fyziologicky relevantní platformu pro rozbor strukturálních a funkčních aspektů cytoplazmatické strany jaderného pórového komplexu v lidských buňkách.

37 °C, 5 %_CO2, zvlhčená atmosféra.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Kontaminace mykoplazmaty je vyloučena jak pomocí testů založených na PCR, tak pomocí luminiscenčních metod detekce mykoplazmy.

Aby se zajistilo, že nedojde ke kontaminaci bakteriemi, plísněmi nebo kvasinkami, jsou buněčné kultury denně podrobovány vizuálním kontrolám.

Pro dlouhodobé uchování umístěte lahvičky do kapalného dusíku v plynné fázi při teplotě přibližně -150 až -196 °C. Skladování při -80 °C je přijatelné pouze jako krátký přechodný krok před přemístěním do kapalného dusíku.

Kryokonzervované buněčné linie se přepravují na suchém ledu v ověřených, izolovaných obalech s dostatečným množstvím chladiva, aby se po celou dobu přepravy udržovala teplota přibližně -78 °C. Po obdržení ihned zkontrolujte obal a neprodleně přeneste lahvičky do vhodného skladu.

Ve společnosti Cytion si stojíme za kvalitou a životaschopností našich produktů. Zaručujeme, že naše buňky budou životaschopné na začátku kultivace po dobu 60 dnů po odeslání z našich zařízení. Zaručujeme, že všechny materiály odpovídají specifikacím popsaným v certifikátu analýzy a/nebo v produktovém listu

Úplné informace naleznete v našem <a href=""/Kdo-jsme/Záruka/"" hreflang=""x-default"">Záručním prohlášení