U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup358/RanBP2

U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup358/RanBP2 yra genomo redaguota žmogaus osteosarkomos ląstelių linija, gauta iš U2OS ląstelių, kuriose endogeninis RANBP2 (taip pat žinomas kaip NUP358) lokusas buvo modifikuotas CRISPR/Cas9, kad koduotų SNAPf žymę, suderintą su natūraliu baltymu. Nup358/RanBP2 yra didelis nukleoporinas, lokalizuotas branduolinio porų komplekso (NPC) citoplazminiuose filamentuose ir atliekantis svarbų vaidmenį branduolinio-citoplazminio transporte, SUMOiliacijoje ir mitozės procesuose. Endogeninis žymėjimas užtikrina, kad SNAPf-Nup358 būtų ekspresuojamas fiziologinio promotoriaus kontrole, išlaikant natūralius ekspresijos lygius ir sumažinant artefaktus, susijusius su pernelyg didelės ekspresijos sistemomis.

SNAPf žymė yra greito žymėjimo SNAP žymės variantas, kuris kovalentiškai jungiasi su benzilguaninu konjuguotais substratais, leidžiantis selektyviai ir stabiliai fluorescenciniu būdu žymėti Nup358 gyvose arba fiksuotose ląstelėse. U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup358/RanBP2 ląstelėse jungtinis baltymas lokalizuojasi branduolinėje apvalkale, būdingoje citoplazminių NPC gijų punktualiai pasiskirstymui. Ši konfigūracija palaiko aukštos skiriamosios gebos fluorescencinį vaizdavimą, super skiriamosios gebos mikroskopiją, impulsų-persekiojimo žymėjimą ir vienos molekulės sekimo metodus, skirtus NPC architektūros ir dinamikos tyrimams. Plokščia morfologija ir dideli U2OS ląstelių branduoliai dar labiau palengvina branduolinės apvalkalo struktūrų kiekybinį vaizdavimą.

Šis modelis leidžia tirti Nup358 specifines funkcijas CRM1/eksportino priklausomame branduolinio eksporto procese, Ran GTPazės ciklo reguliacijoje ir citoplazminių transporto platformų erdvinėje organizacijoje. Atsižvelgiant į Nup358 dalyvavimą mitozinio verpstės surinkime ir kinetochoro funkcionavime, ląstelių linija taip pat tinka tirti ląstelių ciklo priklausomą nukleoporinų perskirstymą ir NPC išardymą/surinkimą mitozės metu. U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup358/RanBP2 suteikia fiziologiškai reikšmingą platformą žmogaus ląstelių branduolinio porų komplekso citoplazminės pusės struktūrinių ir funkcinių aspektų analizei.

37 °C, 5 %_CO2, drėkintoje atmosferoje.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Mikoplazmos užterštumas atmetamas taikant PGR pagrįstus tyrimus ir liuminescencinius mikoplazmos aptikimo metodus.

Siekiant užtikrinti, kad nebūtų užteršimo bakterijomis, grybeliais ar mielėmis, ląstelių kultūros kasdien vizualiai tikrinamos.

Norėdami ilgai saugoti, įdėkite buteliukus į garų fazės skystą azotą maždaug -150-196 °C temperatūroje. Laikymas -80 °C temperatūroje yra priimtinas tik kaip trumpas tarpinis etapas prieš perkeliant į skystąjį azotą.

Kriokonservuotos ląstelių linijos gabenamos ant sauso ledo patvirtintoje, izoliuotoje pakuotėje su pakankamu kiekiu šaldymo skysčio, kad pervežimo metu būtų palaikoma maždaug -78 °C temperatūra. Gavę pakuotę, nedelsdami ją apžiūrėkite ir nedelsdami perkelkite mėgintuvėlius į tinkamą saugyklą.

" Cytion" garantuoja savo produktų kokybę ir gyvybingumą. Garantuojame, kad mūsų ląstelės bus gyvybingos kultūrų auginimo pradžioje 60 dienų po išsiuntimo iš mūsų gamyklos. Užtikriname, kad visos medžiagos atitinka analizės sertifikate ir (arba) gaminio lape aprašytas specifikacijas

Išsamią informaciją rasite mūsų <a href=""/Kas mes esame/garantijos/" hreflang=""x-default"">Garantijos pareiškime