Pereiti prie turinio
U-2 OS-CRISPR-NUP96-SNAP
Audinys
Kaulas
Liga
Osteosarkoma

Dokumentai

U-2 OS-CRISPR-NUP96-SNAP

Cell line · Prekės numeris 300444

U-2 OS-CRISPR-NUP96-SNAP yra genetiškai modifikuota osteosarkomos ląstelių linija, išgauta iš pirminės žmogaus ląstelių linijos U-2 OS. Ši ląstelių linija buvo genetiškai modifikuota...

€800.00neįskaitant mokesčių ir pristatymo išlaidų
Yra sandėlyje
Lot
Rekomenduojama (šviežiausia partija)
  • CoA
1

01Bendra informacija

Aprašymas

U-2 OS-CRISPR-NUP96-SNAP yra genetiškai modifikuota osteosarkomos ląstelių linija, gauta iš pagrindinės žmogaus ląstelių linijos U-2 OS. Ši ląstelių linija buvo sukurta naudojant CRISPR/Cas9 genomo redagavimo metodą, kad į NUP96 geną būtų įterpta SNAP žymė, leidžianti vizualizuoti ir tirti branduolio porų komplekso dinamiką. Branduolio porų kompleksai (NPC) yra labai svarbūs reguliuojant nukleocitoplazminį pernešimą, o NUP96 yra svarbi NPC sudedamoji dalis, atliekanti esminį vaidmenį jo struktūriniam vientisumui ir funkcijai.

U-2 OS-CRISPR-NUP96-SNAP klone Nr. 33 SNAP žymės integravimas į NUP96 lokusą leidžia specifiškai ir kovalentiškai prijungti fluorescencinius substratus ar kitus cheminius zondus, kurie gali būti naudojami gyvų ląstelių vaizdavimui ir kitiems biocheminiams tyrimams. Dėl šios savybės tai yra neįkainojama priemonė tiriant molekulinę nukleocitoplazminio pernešimo dinamiką, suprantant su NPC susijusias patologijas ir ieškant terapinių junginių, veikiančių NPC funkciją. Ląstelių linija taip pat išlaiko tėvinės U-2 OS linijos savybes, tarp kurių yra aukštas genetinio stabilumo lygis ir paprastas kultivavimas, todėl ji tinkama didelio našumo atrankinei patikrai ir išplėstiniams ląstelės biologijos tyrimams.

Dėl NUP96 geno modifikacijos specifiškumo U-2 OS-CRISPR-NUP96-SNAP klonas Nr. 33 yra unikalus modelis, skirtas išsamiai ištirti NPC komponentus ląstelės funkcijos ir disfunkcijos kontekste. Mokslininkai gali pasinaudoti SNAP žymėjimo sistema, kad selektyviai ir greitai paženklintų NUP96, taip palengvindami NPC dinamikos vizualizavimą realiuoju laiku fiziologinėmis ir patologinėmis sąlygomis. Šis specifinis klonas gali būti patikima platforma tiek fundamentiniams tyrimams, tiek taikomiesiems biomedicininiams tyrimams, reikšmingai prisidedanti prie ląstelės biologijos, genetikos ir onkologijos sričių.

Audinys
Kaulas
Liga
Osteosarkoma

02Klasifikacija

Organizmas
Žmogus
Seksas
Moteris
Augimo savybės
Prisijungęs
GMO statusas
GMO-S1
Išsami informacija apie GMO statusą
GMO-S1: This human osteosarcoma cell line (U2OS-CRISPR-NUP96-SNAP, clone 33) contains a CRISPR-engineered NUP96-SNAP fusion facilitating SNAP-tag chemical labeling of nuclear pores. The modification is stably integrated. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Biologinio saugumo lygis
1

03Identifikatoriai

Nuoroda
U-2 OS-CRISPR-NUP96-SNAP (Cytion katalogo numeris 300444)
NCBI mokesčių identifikavimo kodas
9606
Cellosaurus
CVCL_B7FL
Indėlininkas
Ellenbergo laboratorija (EMBL)

04Išraiška ir jautrumas

Baltojų baltymų ekspresija
NUP96-SNAP (branduolio porų komplekso baltymas 96, SNAP žymė)

05Laikymas ir auginimas

Maitinamoji terpė
McCoys 5a, w: 3,0 g/l gliukozės, w: stabilus glutaminas, w: 2,0 mM natrio piruvatas, w: 2,2 g/l NaHCO3 (Cytion gaminio numeris 820200a)
Inkubacijos aplinka

37 °C, 5 %CO2, drėkintoje atmosferoje.

Maisto papildai
Papildykite terpę 10 % FBS, 3,0 g/l gliukozės, stabiliu glutaminu, 2,0 mM natrio piruvato, 2,2 g/l NaHCO3, 1 % NEAA
Disociacijos reagentas
Accutase
Subkultūrinis auginimas
Pašalinkite seną terpę nuo prilipusių ląstelių ir nuplaukite jas PBS, kuriame nėra kalcio ir magnio. T25 kolboms naudokite 3-5 ml PBS, o T75 kolboms - 5-10 ml. Tuomet visiškai užpilkite ląsteles "Accutase", naudodami 1-2 ml T25 kolboms ir 2,5 ml T75 kolboms. Leiskite ląstelėms inkubuotis kambario temperatūroje 8-10 minučių, kad jos atsiskirtų. Po inkubacijos atsargiai sumaišykite ląsteles su 10 ml terpės, kad jos vėl suspenduotų, tada 3 minutes centrifuguokite 300xg greičiu. Išmeskite supernatantą, vėl sutirpinkite ląsteles šviežioje terpėje ir perkelkite jas į naujas kolbas, kuriose jau yra šviežia terpė.
Sėjos tankis
1 x 104 ląstelės/cm2
Skysčių atnaujinimas
2-3 kartus per savaitę
Atšildymas ir auginimas
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

06Kokybės kontrolė ir kriokonservavimas

Sterilumas

Mikoplazmos užterštumas atmetamas taikant PGR pagrįstus tyrimus ir liuminescencinius mikoplazmos aptikimo metodus.

Siekiant užtikrinti, kad nebūtų užteršimo bakterijomis, grybeliais ar mielėmis, ląstelių kultūros kasdien vizualiai tikrinamos.

Šaldymo terpė
Kaip kriokonservavimo terpę naudojame visišką augimo terpę (įskaitant FBS) + 10 % DMSO, kad būtų užtikrintas tinkamas gyvybingumas po atšildymo, arba CM-1 (Cytion katalogo numeris 800100), kurioje yra optimizuotų osmoprotektorių ir medžiagų apykaitos stabilizatorių, kad būtų pagerintas atsigavimas ir sumažintas kriokonservavimo sukeltas stresas.
Laikymo sąlygos

Norėdami ilgai saugoti, įdėkite buteliukus į garų fazės skystą azotą maždaug -150-196 °C temperatūroje. Laikymas -80 °C temperatūroje yra priimtinas tik kaip trumpas tarpinis etapas prieš perkeliant į skystąjį azotą.

Pristatymo sąlygos

Kriokonservuotos ląstelių linijos gabenamos ant sauso ledo patvirtintoje, izoliuotoje pakuotėje su pakankamu kiekiu šaldymo skysčio, kad pervežimo metu būtų palaikoma maždaug -78 °C temperatūra. Gavę pakuotę, nedelsdami ją apžiūrėkite ir nedelsdami perkelkite mėgintuvėlius į tinkamą saugyklą.

07Donoras

Donoro amžius
15 metų
Etninė priklausomybė
Kaukaziečių