Langsung ke isi
U-2 OS-CRISPR-NUP96-SNAP
Tisu
Tulang
Penyakit
Osteosarkoma

U-2 OS-CRISPR-NUP96-SNAP

Cell line · Nomor produk 300444

U-2 OS-CRISPR-NUP96-SNAP adalah garis sel osteosarkoma yang dimodifikasi secara genetik, yang berasal dari garis sel manusia induk U-2 OS. Garis sel ini telah dimodifikasi...

€800.00belum termasuk pajak dan ongkos kirim
Tersedia
Lot
Direkomendasikan (stok terbaru)
  • CoA
1

01Informasi umum

Deskripsi

U-2 OS-CRISPR-NUP96-SNAP adalah garis sel osteosarkoma yang dimodifikasi secara genetik yang berasal dari garis sel manusia U-2 OS. Garis sel ini telah direkayasa melalui pengeditan genom yang dimediasi CRISPR / Cas9 untuk memasukkan tag SNAP pada gen NUP96, yang memungkinkan visualisasi dan studi dinamika kompleks pori nuklir. Kompleks pori nuklir (NPC) sangat penting untuk pengaturan transpor nukleositoplasma, dan NUP96 adalah komponen penting dari NPC, yang memainkan peran penting dalam integritas dan fungsi struktural.

Dalam klon U-2 OS-CRISPR-NUP96-SNAP no.33, integrasi tag SNAP pada lokus NUP96 memungkinkan pelekatan spesifik dan kovalen dari substrat fluoresen atau probe kimiawi lainnya yang dapat digunakan untuk pencitraan sel hidup dan uji biokimia lainnya. Fitur ini menjadikannya alat yang sangat berharga untuk menyelidiki dinamika molekuler transpor nukleositoplasma, memahami patologi terkait NPC, dan menyaring senyawa terapeutik yang memengaruhi fungsi NPC. Garis sel juga mempertahankan karakteristik garis OS U-2 parental, yang mencakup tingkat stabilitas genetik yang tinggi dan kemudahan kultur, sehingga cocok untuk skrining throughput tinggi dan studi yang diperluas dalam biologi sel.

Karena kekhususan modifikasi pada gen NUP96, klon U-2 OS-CRISPR-NUP96-SNAP no. 33 menyediakan model unik untuk studi terperinci tentang komponen NPC dalam konteks fungsi dan disfungsi seluler. Para peneliti dapat mengeksploitasi sistem SNAP-tag untuk memberi label NUP96 secara selektif dan cepat, memfasilitasi visualisasi dinamika NPC secara real-time dalam kondisi fisiologis dan patologis. Klon spesifik ini dapat berfungsi sebagai platform yang kuat untuk penelitian dasar dan studi biomedis terapan, yang berkontribusi secara signifikan pada bidang biologi seluler, genetika, dan onkologi.

Tisu
Tulang
Penyakit
Osteosarkoma

02Klasifikasi

Organisme
Manusia
Seks
Perempuan
Sifat-sifat pertumbuhan
Pengikut
Status GMO
GMO-S1
Rincian status GMO
GMO-S1: This human osteosarcoma cell line (U2OS-CRISPR-NUP96-SNAP, clone 33) contains a CRISPR-engineered NUP96-SNAP fusion facilitating SNAP-tag chemical labeling of nuclear pores. The modification is stably integrated. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Tingkat keamanan hayati
1

03Pengidentifikasi

Referensi
U-2 OS-CRISPR-NUP96-SNAP (nomor katalog Cytion 300444)
Nomor Identifikasi Pajak NCBI
9606
Cellosaurus
CVCL_B7FL
Nasabah penyimpanan
Laboratorium Ellenberg (Ellenberg Lab) (EMBL)

04Ekspresi dan kerentanan

Ekspresi protein
NUP96-SNAP (protein kompleks pori nuklir 96, tag SNAP)

05Penanganan dan budidaya

Media kultur
McCoys 5a, w: 3,0 g/L Glukosa, w: stabil Glutamin, w: 2,0 mM Natrium piruvat, w: 2,2 g/L NaHCO3 (Nomor artikel Cytion 820200a)
Suasana inkubasi

37°C, 5%CO2, atmosfer yang dilembabkan.

Suplemen
Lengkapi media dengan 10% FBS, 3,0 g/L Glukosa, Glutamin stabil, 2,0 mM Natrium piruvat, 2,2 g/L NaHCO3, 1% NEAA
Reagen disosiasi
Accutase
Perbanyakan sel
Buang media lama dari sel yang melekat dan cuci dengan PBS yang tidak mengandung kalsium dan magnesium. Untuk labu T25, gunakan 3-5 ml PBS, dan untuk labu T75, gunakan 5-10 ml. Kemudian, tutupi sel sepenuhnya dengan Accutase, menggunakan 1-2 ml untuk labu T25 dan 2,5 ml untuk labu T75. Biarkan sel diinkubasi pada suhu kamar selama 8-10 menit untuk melepaskannya. Setelah inkubasi, campurkan sel secara perlahan dengan 10 ml medium untuk meresuspensi sel, kemudian sentrifugasi pada 300xg selama 3 menit. Buang supernatan, resuspensi sel dalam medium segar, dan pindahkan ke dalam labu baru yang sudah berisi medium segar.
Kepadatan penanaman
1 x 10⁴ sel/cm²
Pergantian cairan
2 hingga 3 kali per minggu
Pencairan dan pembiakan
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

06Pengendalian mutu dan kriopreservasi

Kemandulan

Kontaminasi mikoplasma disingkirkan dengan menggunakan tes berbasis PCR dan metode deteksi mikoplasma berbasis pendaran.

Untuk memastikan tidak ada kontaminasi bakteri, jamur, atau ragi, kultur sel menjalani inspeksi visual setiap hari.

Media pembekuan
Sebagai media kriopreservasi, kami menggunakan media pertumbuhan lengkap (termasuk FBS) + 10% DMSO untuk viabilitas pasca-pencairan yang memadai, atau CM-1 (nomor katalog Cytion 800100), yang mencakup osmoprotektan yang dioptimalkan dan penstabil metabolisme untuk meningkatkan pemulihan dan mengurangi stres yang diinduksi kriopreservasi.
Kondisi penyimpanan

Untuk pengawetan jangka panjang, tempatkan botol dalam nitrogen cair fase uap pada suhu sekitar -150 hingga -196 °C. Penyimpanan pada suhu -80 °C hanya dapat diterima sebagai langkah sementara sebelum dipindahkan ke nitrogen cair.

Ketentuan pengiriman

Lini sel kriopreservasi dikirim di atas es kering dalam kemasan terisolasi yang divalidasi dengan refrigeran yang cukup untuk mempertahankan suhu sekitar -78 ° C selama perjalanan. Setelah diterima, segera periksa wadah dan pindahkan botol tanpa penundaan ke tempat penyimpanan yang sesuai.

07Donatur

Usia donor
15 tahun
Etnis
Kaukasia