U2OS-CRISPR-TPR-SNAP

U2OS-CRISPR-TPR-SNAP adalah garis sel osteosarcoma manusia yang dimodifikasi genomnya, yang berasal dari sel U2OS, di mana gen TPR (Translocated Promoter Region) endogen telah dimodifikasi menggunakan teknologi CRISPR/Cas9 untuk mengkodekan tag SNAP yang berada dalam bingkai pembacaan. TPR adalah nukleoporin berstruktur gulungan spiral besar yang berlokasi di keranjang nuklear pada sisi nukleoplasma kompleks pori nuklear (NPC). Dengan menandai TPR di lokusnya yang asli, protein fusi diekspresikan di bawah kendali regulasi alami, mempertahankan tingkat ekspresi fisiologis dan memastikan integrasi yang tepat ke dalam struktur keranjang nuklear.

Tag SNAP memungkinkan penandaan kovalen TPR dengan substrat fluoresen yang dikonjugasi dengan benzylguanine pada sel hidup atau yang telah difiksasi, memungkinkan visualisasi yang sangat spesifik dan stabil. Pada sel U2OS-CRISPR-TPR-SNAP, TPR yang dilabeli menunjukkan distribusi bercak cincin khas di selubung nukleus, sesuai dengan struktur keranjang nukleus yang terkait dengan NPC. Sistem ini sangat cocok untuk mikroskopi fluoresensi kuantitatif, pencitraan super-resolusi, penandaan pulse-chase, dan studi dinamis perakitan dan perputaran keranjang nukleus. Morfologi datar dan nukleus besar sel U2OS memudahkan pencitraan resolusi tinggi struktur yang terkait dengan selubung nukleus.

TPR memainkan peran kritis dalam ekspor mRNA, regulasi transportasi nuklear, organisasi kromatin di perifer nukleus, dan organisasi genom spasial. TPR juga terlibat dalam pembentukan subkompartemen terkait transportasi nuklear dan pengucilan heterokromatin dari daerah terkait pori nukleus. U2OS-CRISPR-TPR-SNAP menyediakan model yang relevan secara fisiologis untuk menganalisis arsitektur dan dinamika keranjang nukleus, menyelidiki mekanisme transportasi nukleositoplasma, dan mempelajari interaksi kromatin yang terkait dengan selubung nukleus dalam kondisi ekspresi endogen.

37°C, 5%_CO2, atmosfer yang dilembabkan.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Kontaminasi mikoplasma disingkirkan dengan menggunakan tes berbasis PCR dan metode deteksi mikoplasma berbasis pendaran.

Untuk memastikan tidak ada kontaminasi bakteri, jamur, atau ragi, kultur sel menjalani inspeksi visual setiap hari.

Untuk pengawetan jangka panjang, tempatkan botol dalam nitrogen cair fase uap pada suhu sekitar -150 hingga -196 °C. Penyimpanan pada suhu -80 °C hanya dapat diterima sebagai langkah sementara sebelum dipindahkan ke nitrogen cair.

Lini sel kriopreservasi dikirim di atas es kering dalam kemasan terisolasi yang divalidasi dengan refrigeran yang cukup untuk mempertahankan suhu sekitar -78 ° C selama perjalanan. Setelah diterima, segera periksa wadah dan pindahkan botol tanpa penundaan ke tempat penyimpanan yang sesuai.

Di Cytion, kami mendukung kualitas dan kelangsungan hidup produk kami. Kami menjamin bahwa sel kami akan dapat bertahan hidup pada awal kultur selama 60 hari setelah pengiriman dari fasilitas kami. Kami menjamin bahwa semua bahan sesuai dengan spesifikasi yang dijelaskan dalam Sertifikat Analisis dan / atau Lembar Produk

Untuk detail lengkap, silakan merujuk ke <a href=""/Siapa-kami-Garansi/Garansi/"" hreflang=""x-default"">Pernyataan Jaminan kami