U2OS-CRISPR-TPR-SNAP

U2OS-CRISPR-TPR-SNAP ir genomā rediģēta cilvēka osteosarkomas šūnu līnija, kas iegūta no U2OS šūnām, kurās endogēnais TPR (Translocated Promoter Region) gēns ir modificēts, izmantojot CRISPR/Cas9 tehnoloģiju, lai kodētu in-frame SNAP tagu. TPR ir liels spirālveida nukleoporīns, kas lokalizējas kodola grozā kodola poru kompleksa (NPC) nukleoplazmatiskajā pusē. Marķējot TPR tā endogēnajā lokusā, fūzijas proteīns tiek ekspresēts saskaņā ar dabisko regulatīvo kontroli, saglabājot fizioloģiskos ekspresijas līmeņus un uzturot pareizu iekļaušanu kodola groza struktūrā.

SNAP marķieris ļauj kovalenti marķēt TPR ar benzilguanīna konjugētiem fluorescējošiem substrātiem dzīvos vai fiksētos šūnos, nodrošinot ļoti specifisku un stabilu vizualizāciju. U2OS-CRISPR-TPR-SNAP šūnās marķētais TPR parāda raksturīgu punktveida gredzenveida izkliedi kodola apvalkā, kas atbilst NPC saistītajām kodola groza struktūrām. Šī sistēma ir labi piemērota kvantitatīvai fluorescences mikroskopijai, superizšķirtspējas attēlveidošanai, impulsu-pārklājuma marķēšanai un dinamiskajiem pētījumiem par kodola groza montāžu un apgrozījumu. U2OS šūnu plakana morfoloģija un lielie kodoli atvieglo augstas izšķirtspējas attēlveidošanu kodola apvalka saistītajām struktūrām.

TPR spēlē izšķirošu lomu mRNA eksportā, kodola transporta regulācijā, hromatīna organizācijā kodola perifērijā un telpiskā genoma organizācijā. TPR ir iesaistīts arī kodola transporta saistītu subkompartmentu veidošanā un heterohromatīna izslēgšanā no kodola poru saistītiem reģioniem. U2OS-CRISPR-TPR-SNAP nodrošina fizioloģiski atbilstošu modeli kodola groza arhitektūras un dinamikas izpētei, nukleocitoplazmatiskās transporta mehānismu izpētei un kodola apvalka saistīto hromatīna mijiedarbību izpētei endogēnās ekspresijas apstākļos.

37°C, 5%_CO2, mitrināta atmosfēra.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Mikoplazmas piesārņojums tiek izslēgts, izmantojot gan uz PCR balstītus testus, gan uz luminiscenci balstītas mikoplazmas noteikšanas metodes.

Lai pārliecinātos, ka nav baktēriju, sēnīšu vai rauga piesārņojuma, šūnu kultūras katru dienu vizuāli pārbauda.

Ilgstošai uzglabāšanai flakonus ievietojiet šķidrā slāpeklī ar tvaika fāzi aptuveni -150 līdz -196 °C temperatūrā. Uzglabāšana -80 °C temperatūrā ir pieļaujama tikai kā īss starpposms pirms pārvietošanas uz šķidro slāpekli.

Kriokonservētas šūnu līnijas tiek sūtītas uz sausā ledus apstiprinātā, izolētā iepakojumā ar pietiekamu dzesēšanas šķidruma daudzumu, lai visā transportēšanas laikā uzturētu aptuveni -78 °C temperatūru. Pēc saņemšanas nekavējoties pārbaudiet iepakojumu un nekavējoties pārvietojiet flakonus uz atbilstošu uzglabāšanas vietu.

Uzņēmumā Cytion mēs atbalstām savu produktu kvalitāti un dzīvotspēju. Mēs garantējam, ka mūsu šūnas būs dzīvotspējīgas kultivēšanas sākumā 60 dienas pēc nosūtīšanas no mūsu ražotnēm. Mēs nodrošinām, ka visi materiāli atbilst analīzes sertifikātā un/vai produkta lapā aprakstītajām specifikācijām

Lai iegūtu sīkāku informāciju, lūdzu, skatiet mūsu <a href=""/"/Kas mēs esam/garantija/"" hreflang=""x-default"">Garantijas paziņojumu