U2OS-CRISPR-TPR-SNAP

U2OS-CRISPR-TPR-SNAP er en genomredigeret human osteosarkomcellelinje afledt af U2OS-celler, hvor det endogene TPR-gen (Translocated Promoter Region) er blevet modificeret ved hjælp af CRISPR/Cas9-teknologi til at kode for et in-frame SNAP-tag. TPR er et stort coiled-coil-nukleoporin, der lokaliseres til kernekurven på den nukleoplasmatiske side af kerneporekomplekset (NPC). Ved at mærke TPR på dets endogene locus udtrykkes fusionsproteinet under naturlig regulatorisk kontrol, hvilket bevarer fysiologiske ekspressionsniveauer og opretholder korrekt inkorporering i kernekurvstrukturen.

SNAP-tagget muliggør kovalent mærkning af TPR med benzylguanin-konjugerede fluorescerende substrater i levende eller fiksede celler, hvilket giver mulighed for højt specifik og stabil visualisering. I U2OS-CRISPR-TPR-SNAP-celler viser mærket TPR en karakteristisk punktformet ringlignende fordeling ved kernehinden, svarende til NPC-associerede nukleare kurvstrukturer. Dette system er velegnet til kvantitativ fluorescensmikroskopi, superopløsningsbilleddannelse, puls-chase-mærkning og dynamiske studier af nuklear kurvsamling og omsætning. Den flade morfologi og de store kerner i U2OS-celler letter højopløsningsbilleddannelse af kernehindeassocierede strukturer.

TPR spiller en afgørende rolle i mRNA-eksport, regulering af nuklear transport, kromatinorganisation ved kerneperiferien og rumlig genomorganisation. TPR er også impliceret i dannelsen af nukleare transportrelaterede underkompartimenter og i udelukkelsen af heterokromatin fra nukleare porerelaterede regioner. U2OS-CRISPR-TPR-SNAP udgør en fysiologisk relevant model til at analysere arkitekturen og dynamikken i nukleare kurve, undersøge nukleocytoplasmatiske transportmekanismer og studere nukleare membranrelaterede kromatininteraktioner under endogene ekspressionsbetingelser.

37°C, 5%_CO2, befugtet atmosfære.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Mycoplasma-kontaminering udelukkes ved hjælp af både PCR-baserede assays og luminescensbaserede mycoplasma-detektionsmetoder.

For at sikre, at der ikke er nogen bakterie-, svampe- eller gærforurening, underkastes cellekulturerne daglige visuelle inspektioner.

For langtidsopbevaring anbringes hætteglas i flydende nitrogen i dampfase ved ca. -150 til -196 °C. Opbevaring ved -80 °C er kun acceptabelt som et kort mellemtrin før overførsel til flydende nitrogen.

Kryopræserverede cellelinjer sendes på tøris i valideret, isoleret emballage med tilstrækkeligt kølemiddel til at opretholde ca. -78 °C under hele transporten. Ved modtagelse skal beholderen straks inspiceres, og hætteglassene skal straks overføres til passende opbevaring.

Hos Cytion står vi inde for vores produkters kvalitet og levedygtighed. Vi garanterer, at vores celler vil være levedygtige ved kulturens start i 60 dage efter afsendelse fra vores faciliteter. Vi sikrer, at alle materialer er i overensstemmelse med de specifikationer, der er beskrevet i analysecertifikatet og/eller produktarket

For alle detaljer henvises til vores <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Garantierklæring