U2OS-CRISPR-TPR-SNAP

U2OS-CRISPR-TPR-SNAP est une lignée cellulaire humaine d'ostéosarcome génétiquement modifiée dérivée de cellules U2OS dans laquelle le gène TPR (Translocated Promoter Region) endogène a été modifié à l'aide de la technologie CRISPR/Cas9 afin de coder un marqueur SNAP dans le cadre de lecture. Le TPR est une grande nucléoporine enroulée en spirale qui se localise dans le panier nucléaire du côté nucléoplasmique du complexe des pores nucléaires (NPC). En marquant le TPR à son locus endogène, la protéine de fusion est exprimée sous contrôle régulateur natif, préservant les niveaux d'expression physiologiques et maintenant une incorporation appropriée dans la structure du panier nucléaire.

Le marqueur SNAP permet le marquage covalent du TPR avec des substrats fluorescents conjugués à la benzylguanine dans des cellules vivantes ou fixées, ce qui permet une visualisation hautement spécifique et stable. Dans les cellules U2OS-CRISPR-TPR-SNAP, le TPR marqué présente une distribution caractéristique en anneaux ponctués au niveau de l'enveloppe nucléaire, correspondant aux structures du panier nucléaire associées au NPC. Ce système est bien adapté à la microscopie à fluorescence quantitative, à l'imagerie à super-résolution, au marquage par puls-chase et aux études dynamiques de l'assemblage et du renouvellement du panier nucléaire. La morphologie plate et les grands noyaux des cellules U2OS facilitent l'imagerie haute résolution des structures associées à l'enveloppe nucléaire.

Le TPR joue un rôle essentiel dans l'exportation de l'ARNm, la régulation du transport nucléaire, l'organisation de la chromatine à la périphérie nucléaire et l'organisation spatiale du génome. Le TPR est également impliqué dans la formation de sous-compartiments liés au transport nucléaire et dans l'exclusion de l'hétérochromatine des régions associées aux pores nucléaires. U2OS-CRISPR-TPR-SNAP fournit un modèle physiologiquement pertinent pour disséquer l'architecture et la dynamique du panier nucléaire, étudier les mécanismes de trafic nucléocytoplasmique et étudier les interactions entre la chromatine et l'enveloppe nucléaire dans des conditions d'expression endogènes.

37°C, 5%_CO2, atmosphère humidifiée.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

La contamination par les mycoplasmes est exclue à l'aide de tests basés sur la PCR et de méthodes de détection des mycoplasmes basées sur la luminescence.

Pour s'assurer de l'absence de contamination bactérienne, fongique ou levurienne, les cultures cellulaires font l'objet d'inspections visuelles quotidiennes.

Pour une conservation à long terme, placer les flacons dans de l'azote liquide en phase vapeur à une température comprise entre -150 et -196 °C environ. Le stockage à -80 °C n'est acceptable qu'en tant qu'étape intermédiaire de courte durée avant le transfert dans l'azote liquide.

Les lignées cellulaires cryoconservées sont expédiées sur glace sèche dans des emballages isolés et validés, avec suffisamment de réfrigérant pour maintenir une température d'environ -78 °C tout au long du transport. À la réception, inspecter immédiatement le conteneur et transférer sans délai les flacons dans un lieu de stockage approprié.

Chez Cytion, nous nous portons garants de la qualité et de la viabilité de nos produits. Nous garantissons que nos cellules seront viables au début de la culture pendant 60 jours après l'expédition de nos installations. Nous assurons que tous les matériaux sont conformes aux spécifications décrites dans le certificat d'analyse et/ou la fiche produit

Pour plus de détails, veuillez consulter notre <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default""> Déclaration de garantie