U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup358/RanBP2

U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup358/RanBP2 est une lignée cellulaire humaine d'ostéosarcome génétiquement modifiée dérivée de cellules U2OS dans laquelle le locus endogène RANBP2 (également connu sous le nom de NUP358) a été modifié par CRISPR/Cas9 pour coder une étiquette SNAPf en phase avec la protéine native. Nup358/RanBP2 est une grande nucléoporine localisée dans les filaments cytoplasmiques du complexe des pores nucléaires (NPC) et joue un rôle essentiel dans le transport nucléocytoplasmique, la SUMOylation et les processus mitotiques. Le marquage endogène garantit que SNAPf-Nup358 est exprimé sous le contrôle physiologique du promoteur, maintenant les niveaux d'expression natifs et minimisant les artefacts associés aux systèmes de surexpression.

Le marqueur SNAPf est une variante à marquage rapide du marqueur SNAP qui se lie de manière covalente aux substrats conjugués à la benzylguanine, permettant un marquage fluorescent sélectif et stable de Nup358 dans des cellules vivantes ou fixées. Dans les cellules U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup358/RanBP2, la protéine de fusion se localise dans l'enveloppe nucléaire selon une distribution ponctuelle caractéristique des filaments NPC cytoplasmiques. Cette configuration permet l'imagerie par fluorescence à haute résolution, la microscopie à super-résolution, le marquage par pulse-chase et le suivi de molécules individuelles pour étudier l'architecture et la dynamique des NPC. La morphologie plate et les grands noyaux des cellules U2OS facilitent encore davantage l'imagerie quantitative des structures de l'enveloppe nucléaire.

Ce modèle permet d'étudier les rôles spécifiques de Nup358 dans l'export nucléaire dépendant de CRM1/exportine, la régulation du cycle de la GTPase Ran et l'organisation spatiale des plateformes de transport cytoplasmiques. Compte tenu de l'implication de Nup358 dans l'assemblage du fuseau mitotique et la fonction kinétochore, la lignée cellulaire est également adaptée à l'étude de la redistribution des nucléoporines dépendante du cycle cellulaire et du désassemblage/réassemblage des NPC pendant la mitose. U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup358/RanBP2 fournit une plateforme physiologiquement pertinente pour disséquer les aspects structurels et fonctionnels de la face cytoplasmique du complexe des pores nucléaires dans les cellules humaines.

37°C, 5%_CO2, atmosphère humidifiée.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

La contamination par les mycoplasmes est exclue à l'aide de tests basés sur la PCR et de méthodes de détection des mycoplasmes basées sur la luminescence.

Pour s'assurer de l'absence de contamination bactérienne, fongique ou levurienne, les cultures cellulaires font l'objet d'inspections visuelles quotidiennes.

Pour une conservation à long terme, placer les flacons dans de l'azote liquide en phase vapeur à une température comprise entre -150 et -196 °C environ. Le stockage à -80 °C n'est acceptable qu'en tant qu'étape intermédiaire de courte durée avant le transfert dans l'azote liquide.

Les lignées cellulaires cryoconservées sont expédiées sur glace sèche dans des emballages isolés et validés, avec suffisamment de réfrigérant pour maintenir une température d'environ -78 °C tout au long du transport. À la réception, inspecter immédiatement le conteneur et transférer sans délai les flacons dans un lieu de stockage approprié.

Chez Cytion, nous nous portons garants de la qualité et de la viabilité de nos produits. Nous garantissons que nos cellules seront viables au début de la culture pendant 60 jours après l'expédition de nos installations. Nous assurons que tous les matériaux sont conformes aux spécifications décrites dans le certificat d'analyse et/ou la fiche produit

Pour plus de détails, veuillez consulter notre <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default""> Déclaration de garantie