U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup358/RanBP2

U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup358/RanBP2 on genomin muokattu ihmisen osteosarkoomasolulinja, joka on peräisin U2OS-soluista, joissa endogeeninen RANBP2-lokus (tunnetaan myös nimellä NUP358) on muokattu CRISPR/Cas9:llä koodaamaan SNAPf-tunnisteen natiiviproteiinin kanssa samassa kehyksessä. Nup358/RanBP2 on suuri nukleoporiini, joka sijaitsee ydinkompleksin (NPC) sytoplasmisten filamenttien alueella ja jolla on tärkeä rooli ydin-sytoplasman kuljetuksessa, SUMOylaatiossa ja mitoottisissa prosesseissa. Endogeeninen merkintä varmistaa, että SNAPf-Nup358 ilmaistaan fysiologisen promoottorin ohjauksessa, jolloin alkuperäiset ilmentymistasot säilyvät ja yli-ilmentymisjärjestelmien aiheuttamat artefaktit minimoituvat.

SNAPf-tag on SNAP-tagin nopeasti leimautuva variantti, joka sitoutuu kovalenttisesti bentsyyliguaninikonjugoitujen substraattien kanssa, mikä mahdollistaa Nup358:n selektiivisen ja stabiilin fluoresoivan leimautumisen elävissä tai kiinnitetyissä soluissa. U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup358/RanBP2-soluissa fuusioproteiini lokalisoituu tumakoteloon sytoplasmisten NPC-filamenttien tyypilliseen pistemaiseen jakautumiseen. Tämä konfiguraatio tukee korkean resoluution fluoresenssikuvantamista, superresoluutiomikroskopiaa, pulssinjahtimerkintää ja yksittäisten molekyylien seurantaa NPC:n arkkitehtuurin ja dynamiikan tutkimiseksi. U2OS-solujen tasainen morfologia ja suuret tumat helpottavat edelleen tumakalvon rakenteiden kvantitatiivista kuvantamista.

Tämä malli mahdollistaa Nup358:n spesifisten roolien tutkimisen CRM1/eksportiiniriippuvaisessa ydintuonnissa, Ran GTPase -syklin säätelyssä ja sytoplasmisten kuljetusalustojen spatiaalisessa organisoinnissa. Koska Nup358 osallistuu mitoosikierukan kokoonpanoon ja kinetokoorin toimintaan, solulinja sopii myös solusyklistä riippuvan nukleoporiinien uudelleenjakautumisen ja NPC:n purkamisen/uudelleenrakentamisen tutkimiseen mitoosissa. U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup358/RanBP2 tarjoaa fysiologisesti merkityksellisen alustan ihmisen solujen ydinporikompleksin sytoplasmisen pinnan rakenteellisten ja toiminnallisten näkökohtien tutkimiseen.

37 °C, 5 %_CO2, kostutettu ilmakehä.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Mykoplasmakontaminaatio suljetaan pois sekä PCR-pohjaisilla määrityksillä että luminesenssiin perustuvilla mykoplasman osoitusmenetelmillä.

Bakteeri-, sieni- tai hiivakontaminaation välttämiseksi soluviljelmät tarkastetaan päivittäin silmämääräisesti.

Pitkäaikaissäilytystä varten injektiopullot asetetaan höyryfaasissa olevaan nestemäiseen typpeen noin -150 - -196 °C:een. Säilytys -80 °C:ssa on hyväksyttävää vain lyhyenä välivaiheena ennen siirtoa nestemäiseen typpeen.

Kryosäilytetyt solulinjat kuljetetaan kuivajäässä validoidussa, eristetyssä pakkauksessa, jossa on riittävästi kylmäainetta, jotta lämpötila pysyy noin -78 °C:ssa koko kuljetuksen ajan. Pakkaus on tarkastettava välittömästi sen vastaanottamisen jälkeen ja injektiopullot on siirrettävä viipymättä asianmukaiseen varastoon.

Me Cytionilla seisomme tuotteidemme laadun ja elinkelpoisuuden takana. Takaamme, että solumme ovat elinkelpoisia viljelyn alkaessa 60 päivän ajan sen jälkeen, kun ne on lähetetty laitoksestamme. Vakuutamme, että kaikki materiaalit ovat analyysitodistuksessa ja/tai tuoteselosteessa kuvattujen eritelmien mukaisia

Lisätietoja on <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang="""x-default"">Takuulausumassa