U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup358/RanBP2

U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup358/RanBP2 ist eine genomeditierte humane Osteosarkom-Zelllinie, die aus U2OS-Zellen gewonnen wurde, in denen der endogene RANBP2-Locus (auch bekannt als NUP358) durch CRISPR/Cas9 modifiziert wurde, um ein SNAPf-Tag in Frame mit dem nativen Protein zu kodieren. Nup358/RanBP2 ist ein großes Nukleoporin, das in den zytoplasmatischen Filamenten des Kernporenkomplexes (NPC) lokalisiert ist und eine wichtige Rolle beim nukleozytoplasmatischen Transport, der SUMOylierung und mitotischen Prozessen spielt. Die endogene Markierung stellt sicher, dass SNAPf-Nup358 unter physiologischer Promotorkontrolle exprimiert wird, wodurch die nativen Expressionsniveaus aufrechterhalten und Artefakte im Zusammenhang mit Überexpressionssystemen minimiert werden.

Das SNAPf-Tag ist eine schnell markierende Variante des SNAP-Tags, das kovalent an Benzylguanin-konjugierte Substrate bindet und eine selektive und stabile Fluoreszenzmarkierung von Nup358 in lebenden oder fixierten Zellen ermöglicht. In U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup358/RanBP2-Zellen lokalisiert sich das Fusionsprotein in einer punktförmigen Verteilung, die für zytoplasmatische NPC-Filamente charakteristisch ist, an der Kernhülle. Diese Konfiguration unterstützt hochauflösende Fluoreszenzbildgebung, Superauflösungsmikroskopie, Pulse-Chase-Markierung und Einzelmolekül-Tracking-Ansätze zur Untersuchung der NPC-Architektur und -Dynamik. Die flache Morphologie und die großen Kerne der U2OS-Zellen erleichtern zusätzlich die quantitative Bildgebung von Kernhüllenstrukturen.

Dieses Modell ermöglicht die Untersuchung der spezifischen Rollen von Nup358 beim CRM1/Exportin-abhängigen Kern-Export, der Ran-GTPase-Zyklusregulation und der räumlichen Organisation zytoplasmatischer Transportplattformen. Angesichts der Beteiligung von Nup358 am Aufbau der Mitosespindel und der Kinetochor-Funktion eignet sich die Zelllinie auch für die Untersuchung der zellzyklusabhängigen Umverteilung von Nukleoporinen und der NPC-Demontage/Remontage während der Mitose. U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup358/RanBP2 bietet eine physiologisch relevante Plattform für die Analyse struktureller und funktioneller Aspekte der zytoplasmatischen Seite des Kernporenkomplexes in menschlichen Zellen.

37°C, 5%_CO2, befeuchtete Atmosphäre.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Eine Kontamination mit Mykoplasmen wird sowohl durch PCR-basierte Assays als auch durch lumineszenzbasierte Mykoplasmen-Nachweisverfahren ausgeschlossen.

Um sicherzustellen, dass keine Kontamination mit Bakterien, Pilzen oder Hefen vorliegt, werden die Zellkulturen täglich visuell überprüft.

Zur Langzeitkonservierung werden die Fläschchen in flüssigem Stickstoff bei etwa -150 bis -196 °C gelagert. Eine Lagerung bei -80 °C ist nur als kurzer Zwischenschritt vor der Überführung in flüssigen Stickstoff akzeptabel.

Kryokonservierte Zelllinien werden auf Trockeneis in einer validierten, isolierten Verpackung mit ausreichend Kühlmittel versandt, um während des gesamten Transports eine Temperatur von etwa -78 °C aufrechtzuerhalten. Prüfen Sie den Behälter bei Erhalt sofort und bringen Sie die Fläschchen unverzüglich in ein geeignetes Lager.

Bei Cytion stehen wir hinter der Qualität und Lebensfähigkeit unserer Produkte. Wir garantieren, dass unsere Zellen zu Beginn der Kultur für 60 Tage nach dem Versand aus unseren Einrichtungen lebensfähig sind. Wir versichern, dass alle Materialien mit den im Analysezertifikat und/oder Produktblatt beschriebenen Spezifikationen übereinstimmen

Ausführliche Informationen finden Sie in unserer <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Garantieerklärung