U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1

U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1 ist eine genomeditierte humane Osteosarkom-Zelllinie, die aus U2OS-Zellen gewonnen wurde, in denen das endogene SEH1L (SEH1)-Gen mithilfe der CRISPR/Cas9-Technologie modifiziert wurde, um ein In-Frame-SNAPf-Tag zu kodieren. SEH1 ist ein Bestandteil des Y-Komplexes (auch bekannt als NUP107-160-Komplex), einem zentralen Strukturmodul des Kernporenkomplexes (NPC), das zur Bildung und Stabilität des Porengerüsts beiträgt. Durch Einfügen der SNAPf-Kodierungssequenz an der endogenen Stelle wird das markierte SEH1-Protein unter nativer regulatorischer Kontrolle exprimiert, wodurch die physiologischen Expressionsniveaus erhalten bleiben und Störungen der Kernporenzusammensetzung minimiert werden.

Das SNAPf-Tag ist eine künstlich hergestellte, schnell reagierende Variante des SNAP-Tags, das kovalent an Benzylguanin-konjugierte Substrate bindet und eine selektive und stabile Fluoreszenzmarkierung in lebenden oder fixierten Zellen ermöglicht. In U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1-Zellen lokalisiert sich das Fusionsprotein in einem für die NPC-Verteilung charakteristischen punktförmigen Muster an der Kernhülle. Da die Markierung auf endogener Proteinebene erfolgt, eignet sich dieses System gut für quantitative Fluoreszenzmikroskopie, Superauflösungsbildgebung und Einzelpartikel-Tracking-Analysen, die darauf abzielen, die NPC-Organisation und -Stöchiometrie zu untersuchen. Die flache Morphologie und die großen Kerne der U2OS-Zellen erleichtern zusätzlich die hochauflösende Visualisierung der Kernhüllenstrukturen.

SEH1 ist an der NPC-Biogenese beteiligt und spielt auch eine Rolle bei kinetochorassoziierten Prozessen während der Mitose. Dementsprechend bietet diese Zelllinie eine robuste Plattform für die Untersuchung der zellzyklusabhängigen NPC-Assemblierung und -Disassemblierung, der räumlichen Organisation des Y-Komplexes innerhalb des Porengerüsts und der potenziellen Doppelrolle von SEH1 an der Kernhülle und den mitotischen Kinetochoren. U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1 ermöglicht mechanistische Untersuchungen der Architektur und Dynamik von Kernporen unter physiologisch relevanten Expressionsbedingungen.

37°C, 5%_CO2, befeuchtete Atmosphäre.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Eine Kontamination mit Mykoplasmen wird sowohl durch PCR-basierte Assays als auch durch lumineszenzbasierte Mykoplasmen-Nachweisverfahren ausgeschlossen.

Um sicherzustellen, dass keine Kontamination mit Bakterien, Pilzen oder Hefen vorliegt, werden die Zellkulturen täglich visuell überprüft.

Zur Langzeitkonservierung werden die Fläschchen in flüssigem Stickstoff bei etwa -150 bis -196 °C gelagert. Eine Lagerung bei -80 °C ist nur als kurzer Zwischenschritt vor der Überführung in flüssigen Stickstoff akzeptabel.

Kryokonservierte Zelllinien werden auf Trockeneis in einer validierten, isolierten Verpackung mit ausreichend Kühlmittel versandt, um während des gesamten Transports eine Temperatur von etwa -78 °C aufrechtzuerhalten. Prüfen Sie den Behälter bei Erhalt sofort und bringen Sie die Fläschchen unverzüglich in ein geeignetes Lager.

Bei Cytion stehen wir hinter der Qualität und Lebensfähigkeit unserer Produkte. Wir garantieren, dass unsere Zellen zu Beginn der Kultur für 60 Tage nach dem Versand aus unseren Einrichtungen lebensfähig sind. Wir versichern, dass alle Materialien mit den im Analysezertifikat und/oder Produktblatt beschriebenen Spezifikationen übereinstimmen

Ausführliche Informationen finden Sie in unserer <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Garantieerklärung