U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1

U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1 är en genredigerad human osteosarkomcellinje som härrör från U2OS-celler, där det endogena SEH1L-genet (SEH1) har modifierats med hjälp av CRISPR/Cas9-teknik för att koda för en in-frame SNAPf-tagg. SEH1 är en komponent i Y-komplexet (även känt som NUP107-160-komplexet), en central strukturell modul i kärnporekomplexet (NPC) som bidrar till porstommens sammansättning och stabilitet. Genom att infoga SNAPf-kodningssekvensen på den endogena lokusen uttrycks det taggade SEH1-proteinet under naturlig regulatorisk kontroll, vilket bevarar fysiologiska expressionsnivåer och minimerar störningar i kärnporernas sammansättning.

SNAPf-taggen är en konstruerad, snabbverkande variant av SNAP-taggen som kovalent binder bensylguaninkonjugerade substrat, vilket möjliggör selektiv och stabil fluorescerande märkning i levande eller fixerade celler. I U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1-celler lokaliseras fusionsproteinet till kärnmembranet i ett punktmönster som är karakteristiskt för NPC-distribution. Eftersom märkningen sker på endogena proteinnivåer är detta system väl lämpat för kvantitativ fluorescensmikroskopi, superupplösningsavbildning och enkelpartikelspårningsanalyser som syftar till att dissekera NPC-organisationen och stökiometrin. Den plana morfologin och de stora kärnorna i U2OS-celler underlättar ytterligare högupplöst visualisering av kärnmembranstrukturer.

SEH1 deltar i NPC-biogenes och har också kopplats till kinetokorassocierade processer under mitos. Följaktligen utgör denna cellinje en robust plattform för att undersöka cellcykelberoende NPC-montering och demontering, den rumsliga organisationen av Y-komplexet inom porstommen och SEH1:s potentiella dubbla roller vid kärnmembranet och mitotiska kinetokorer. U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1 möjliggör mekanistiska studier av kärnporernas arkitektur och dynamik under fysiologiskt relevanta expressionsförhållanden.

37°C, 5%_CO2, befuktad atmosfär.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Mykoplasmakontaminering utesluts med hjälp av både PCR-baserade analyser och luminiscensbaserade metoder för mykoplasmadiagnostik.

För att säkerställa att det inte finns någon kontaminering av bakterier, svamp eller jäst utsätts cellkulturerna för dagliga visuella inspektioner.

För långtidsförvaring, placera flaskorna i flytande kväve i ångfas vid ca -150 till -196 °C. Förvaring vid -80 °C är acceptabelt endast som ett kort mellanliggande steg innan överföring till flytande kväve.

Kryopreserverade cellinjer skickas på torris i validerade, isolerade förpackningar med tillräckligt med kylmedel för att hålla cirka -78 °C under hela transporten. Vid mottagandet ska behållaren omedelbart inspekteras och flaskorna utan dröjsmål överföras till lämplig förvaring.

På Cytion står vi bakom våra produkters kvalitet och livskraft. Vi garanterar att våra celler är livsdugliga vid odlingens början i 60 dagar efter leverans från våra anläggningar. Vi försäkrar att allt material överensstämmer med de specifikationer som beskrivs i analyscertifikatet och/eller produktbladet

För fullständig information, se vår <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Garantiförklaring