U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1

U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1 yra genomo redaguota žmogaus osteosarkomos ląstelių linija, gauta iš U2OS ląstelių, kuriose endogeninis SEH1L (SEH1) genas buvo modifikuotas naudojant CRISPR/Cas9 technologiją, kad koduotų in-frame SNAPf žymę. SEH1 yra Y komplekso (taip pat žinomo kaip NUP107-160 kompleksas) komponentas, branduolinio porų komplekso (NPC) pagrindinis struktūrinis modulis, kuris prisideda prie porų karkaso surinkimo ir stabilumo. Įterpiant SNAPf kodavimo seką į endogeninį lokusą, žymėtas SEH1 baltymas yra ekspresuojamas pagal natūralų reguliavimo kontrolę, išlaikant fiziologinius ekspresijos lygius ir sumažinant branduolinio porų sudėties sutrikimus.

SNAPf žymė yra inžinerinis, greitai reaguojantis SNAP žymės variantas, kuris kovalentiškai jungiasi su benzilguaninu konjuguotais substratais, leidžiantis selektyvų ir stabilų fluorescencinį žymėjimą gyvose arba fiksuotose ląstelėse. U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1 ląstelėse jungtinis baltymas lokalizuojasi branduolinėje apvalkale taškinio modelio forma, būdinga NPC pasiskirstymui. Kadangi žymėjimas vyksta endogeninių baltymų lygiu, ši sistema puikiai tinka kiekybinei fluorescencinei mikroskopijai, super-rezoliucijos vaizdams ir vienos dalelės sekimo analizėms, kurių tikslas yra išanalizuoti NPC organizavimą ir stechiometriją. Plokščia morfologija ir dideli U2OS ląstelių branduoliai dar labiau palengvina branduolinės apvalkalo struktūrų vizualizavimą aukšta rezoliucija.

SEH1 dalyvauja NPC biogenezėje ir taip pat yra susijęs su kinetochorais susijusiais procesais mitozės metu. Atitinkamai, ši ląstelių linija suteikia tvirtą platformą ląstelių ciklo priklausomo NPC surinkimo ir išardymo, Y-komplekso erdvinės organizacijos porų karkase ir potencialių SEH1 dvigubų vaidmenų branduolinėje apvalkale ir mitoziniuose kinetochoruose tyrimams. U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1 leidžia atlikti mechanistinius branduolinės poros architektūros ir dinamikos tyrimus fiziologiškai reikšmingomis ekspresijos sąlygomis.

37 °C, 5 %_CO2, drėkintoje atmosferoje.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Mikoplazmos užterštumas atmetamas taikant PGR pagrįstus tyrimus ir liuminescencinius mikoplazmos aptikimo metodus.

Siekiant užtikrinti, kad nebūtų užteršimo bakterijomis, grybeliais ar mielėmis, ląstelių kultūros kasdien vizualiai tikrinamos.

Norėdami ilgai saugoti, įdėkite buteliukus į garų fazės skystą azotą maždaug -150-196 °C temperatūroje. Laikymas -80 °C temperatūroje yra priimtinas tik kaip trumpas tarpinis etapas prieš perkeliant į skystąjį azotą.

Kriokonservuotos ląstelių linijos gabenamos ant sauso ledo patvirtintoje, izoliuotoje pakuotėje su pakankamu kiekiu šaldymo skysčio, kad pervežimo metu būtų palaikoma maždaug -78 °C temperatūra. Gavę pakuotę, nedelsdami ją apžiūrėkite ir nedelsdami perkelkite mėgintuvėlius į tinkamą saugyklą.

" Cytion" garantuoja savo produktų kokybę ir gyvybingumą. Garantuojame, kad mūsų ląstelės bus gyvybingos kultūrų auginimo pradžioje 60 dienų po išsiuntimo iš mūsų gamyklos. Užtikriname, kad visos medžiagos atitinka analizės sertifikate ir (arba) gaminio lape aprašytas specifikacijas

Išsamią informaciją rasite mūsų <a href=""/Kas mes esame/garantijos/" hreflang=""x-default"">Garantijos pareiškime