Pereiti prie turinio
U-2 OS-CRISPR-NUP96-mMaple
Audinys
Kaulas
Liga
Osteosarkoma

Dokumentai

U-2 OS-CRISPR-NUP96-mMaple

Cell line · Prekės numeris 300461

„U-2 OS-CRISPR-NUP96-mMaple“ – tai genetiškai modifikuota osteosarkomos ląstelių linija, išvestas iš žmogaus U-2 OS ląstelių linijos, žinomos dėl savo spartaus augimo...

€800.00neįskaitant mokesčių ir pristatymo išlaidų
Yra sandėlyje
Lot
Rekomenduojama (šviežiausia partija)
  • CoA
1

01Bendra informacija

Aprašymas

U-2 OS-CRISPR-NUP96-mMaple yra genetiškai sukurta osteosarkomos ląstelių linija, gauta iš žmogaus U-2 OS ląstelių linijos, žinomos dėl savo stiprių augimo savybių ir naudingumo atliekant įvairius biologinius tyrimus. Šis konkretus klonas buvo modifikuotas naudojant CRISPR/Cas9 genų redagavimo technologiją, kad į NUP96 geną būtų įtrauktas mMaple - fotokonvertuojamas fluorescencinis baltymas. Baltymas mMaple leidžia taikyti pažangius vaizdavimo metodus, tokius kaip gyvų ląstelių vaizdavimas ir superišsiskiriančioji mikroskopija, leidžiančius dinamiškai įžvelgti branduolio porų komplekso (NPC) elgseną ir ląstelių importo ir eksporto mechanizmus per branduolio apvalkalą.

NUP96 genas, koduojantis svarbų NPC komponentą, yra gyvybiškai svarbus nukleocitoplazminiam pernešimui. NUP96 pokyčiai gali turėti įtakos ne tik transportavimo mechanizmams, bet ir bendrai branduolio architektūrai ir funkcijai. Todėl ši ląstelių linija yra puikus modelis su NPC susijusioms patologijoms ir branduolio transporto vaidmeniui ląstelių metabolizme ir signalizavime tirti. MMaple integracija į NUP96 leidžia realiuoju laiku stebėti ir vizualizuoti NUP96 dinamiką in vivo, todėl tai yra nepakeičiama priemonė mokslininkams, besigilinantiems į ląstelių branduolių tyrimus ir tyrinėjantiems NPC funkcijų sutrikimų reikšmę tokioms ligoms kaip vėžys ir virusinės infekcijos.

U-2 OS-CRISPR-NUP96-mMaple klonas Nr. 16, kaip specializuotas įrankis, palaiko didelės skiriamosios gebos vaizdavimą ir suteikia daug duomenų apie NPC komponentų erdvinį ir laikinį pasiskirstymą. Jis ypač vertingas atliekant eksperimentus, kai reikia išsamiai analizuoti genų raišką, baltymų lokalizaciją ir branduolių pernešimą fiziologinėmis ir patologinėmis sąlygomis, o tai padeda geriau suprasti ląstelinius procesus molekuliniu lygmeniu.

Audinys
Kaulas
Liga
Osteosarkoma

02Klasifikacija

Organizmas
Žmogus
Seksas
Moteris
Augimo savybės
Prisijungęs
GMO statusas
GMO-S1
Išsami informacija apie GMO statusą
GMO-S1: This human osteosarcoma cell line (U2OS-CRISPR-NUP96-mMaple, clone 16) contains a CRISPR-mediated NUP96-mMaple fusion enabling photoconvertible labeling of nuclear pore structures. The construct is stably present. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Biologinio saugumo lygis
1

03Identifikatoriai

Nuoroda
U-2 OS-CRISPR-NUP96-mMaple (Cytion katalogo numeris 300461)
NCBI mokesčių identifikavimo kodas
9606
Cellosaurus
CVCL_B7FK
Indėlininkas
Ellenbergo laboratorija (EMBL)

04Išraiška ir jautrumas

Baltojų baltymų ekspresija
NUP96-mMaple (endogeninis branduolio porų komplekso baltymas 96, pažymėtas mMaple)

05Laikymas ir auginimas

Maitinamoji terpė
McCoys 5a, w: 3,0 g/l gliukozės, w: stabilus glutaminas, w: 2,0 mM natrio piruvatas, w: 2,2 g/l NaHCO3 (Cytion gaminio numeris 820200a)
Inkubacijos aplinka

37 °C, 5 %CO2, drėkintoje atmosferoje.

Maisto papildai
Papildykite terpę 10 % FBS, 1 % NEAA
Disociacijos reagentas
Accutase
Subkultūrinis auginimas
Pašalinkite seną terpę nuo prilipusių ląstelių ir nuplaukite jas PBS, kuriame nėra kalcio ir magnio. T25 kolboms naudokite 3-5 ml PBS, o T75 kolboms - 5-10 ml. Tuomet visiškai užpilkite ląsteles "Accutase", naudodami 1-2 ml T25 kolboms ir 2,5 ml T75 kolboms. Leiskite ląstelėms inkubuotis kambario temperatūroje 8-10 minučių, kad jos atsiskirtų. Po inkubacijos atsargiai sumaišykite ląsteles su 10 ml terpės, kad jos vėl suspenduotų, tada 3 minutes centrifuguokite 300xg greičiu. Išmeskite supernatantą, vėl sutirpinkite ląsteles šviežioje terpėje ir perkelkite jas į naujas kolbas, kuriose jau yra šviežia terpė.
Sėjos tankis
1 x 104 ląstelės/cm2
Skysčių atnaujinimas
2-3 kartus per savaitę
Atšildymas ir auginimas
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

06Kokybės kontrolė ir kriokonservavimas

Sterilumas

Mikoplazmos užterštumas atmetamas taikant PGR pagrįstus tyrimus ir liuminescencinius mikoplazmos aptikimo metodus.

Siekiant užtikrinti, kad nebūtų užteršimo bakterijomis, grybeliais ar mielėmis, ląstelių kultūros kasdien vizualiai tikrinamos.

Šaldymo terpė
Kaip kriokonservavimo terpę naudojame visišką augimo terpę (įskaitant FBS) + 10 % DMSO, kad būtų užtikrintas tinkamas gyvybingumas po atšildymo, arba CM-1 (Cytion katalogo numeris 800100), kurioje yra optimizuotų osmoprotektorių ir medžiagų apykaitos stabilizatorių, kad būtų pagerintas atsigavimas ir sumažintas kriokonservavimo sukeltas stresas.
Laikymo sąlygos

Norėdami ilgai saugoti, įdėkite buteliukus į garų fazės skystą azotą maždaug -150-196 °C temperatūroje. Laikymas -80 °C temperatūroje yra priimtinas tik kaip trumpas tarpinis etapas prieš perkeliant į skystąjį azotą.

Pristatymo sąlygos

Kriokonservuotos ląstelių linijos gabenamos ant sauso ledo patvirtintoje, izoliuotoje pakuotėje su pakankamu kiekiu šaldymo skysčio, kad pervežimo metu būtų palaikoma maždaug -78 °C temperatūra. Gavę pakuotę, nedelsdami ją apžiūrėkite ir nedelsdami perkelkite mėgintuvėlius į tinkamą saugyklą.

07Donoras

Donoro amžius
15 metų
Etninė priklausomybė
Kaukaziečių