U-2 OS-CRISPR-NUP96-mMaple

A U-2 OS-CRISPR-NUP96-mMaple é uma linhagem celular de osteossarcoma geneticamente modificada, derivada da linhagem celular humana U-2 OS, conhecida por suas características de crescimento robusto e utilidade em diversos estudos biológicos. Esse clone específico foi modificado por meio da tecnologia de edição genética CRISPR/Cas9 para incorporar a mMaple, uma proteína fluorescente fotoconversível, ao gene NUP96. A proteína mMaple permite o uso de técnicas avançadas de imagem, como imagem de células vivas e microscopia de super-resolução, proporcionando insights dinâmicos sobre o comportamento do complexo de poros nucleares (NPC) e os mecanismos de importação e exportação celular através do envelope nuclear.

O gene NUP96, que codifica um componente crucial do NPC, é vital para o transporte nucleocitoplasmático. Alterações no NUP96 podem afetar não apenas os mecanismos de transporte, mas também a arquitetura e a função nuclear como um todo. Essa linhagem celular serve, portanto, como um excelente modelo para o estudo de patologias relacionadas ao NPC e do papel do transporte nuclear no metabolismo e na sinalização celular. A integração do mMaple ao NUP96 permite o rastreamento e a visualização em tempo real da dinâmica do NUP96 in vivo, tornando-o uma ferramenta indispensável para pesquisadores focados em estudos do núcleo celular e para aqueles que exploram as implicações das disfunções do NPC em doenças como câncer e infecções virais.

Como ferramenta especializada, o clone U-2 OS-CRISPR-NUP96-mMaple nº 16 permite a obtenção de imagens de alta resolução e fornece dados substanciais sobre a distribuição espacial e temporal dos componentes do NPC. É particularmente valioso para experimentos que exigem análise detalhada da expressão gênica, localização de proteínas e transporte nuclear em condições fisiológicas e patológicas, facilitando uma compreensão mais profunda dos processos celulares no nível molecular.

37 °C, 5% de CO₂, atmosfera umidificada.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

A contaminação por micoplasma é descartada por meio de ensaios baseados em PCR e de métodos de detecção de micoplasma baseados em luminescência.

Para garantir que não haja contaminação por bactérias, fungos ou leveduras, as culturas celulares são submetidas a inspeções visuais diárias.

Para preservação a longo prazo, coloque os frascos em nitrogênio líquido em fase de vapor a uma temperatura entre aproximadamente −150 e −196 °C. O armazenamento a −80 °C é aceitável apenas como uma etapa intermediária de curta duração antes da transferência para o nitrogênio líquido.

As linhagens celulares criopreservadas são enviadas em gelo seco, em embalagens isoladas e validadas, com refrigerante suficiente para manter a temperatura em aproximadamente −78 °C durante todo o transporte. Ao receber a remessa, inspecione o recipiente imediatamente e transfira os frascos sem demora para o local de armazenamento adequado.

Na Cytion, garantimos a qualidade e a viabilidade de nossos produtos. Garantimos que nossas células permanecerão viáveis no início da cultura por 60 dias após o envio de nossas instalações. Asseguramos que todos os materiais estão em conformidade com as especificações descritas no Certificado de Análise e/ou na Ficha Técnica do Produto.

Para obter todos os detalhes, consulte nossa Declaração de Garantia.