Skip to content
U-2 OS-CRISPR-NUP96-mMaple
Tissue
Xương
Disease
U xương

Documents

U-2 OS-CRISPR-NUP96-mMaple

Cell line · Product number 300461

The U-2 OS-CRISPR-NUP96-mMaple is a genetically engineered osteosarcoma cell line derived from the human U-2 OS cell line, known for its robust growth cha...

€800.00excl. tax and shipping

Customization / Recommendations

In stock
Lot
Recommended (freshest lot)
  • CoA
1

01General information

Description

Dòng tế bào ung thư xương U-2 OS-CRISPR-NUP96-mMaple là một dòng tế bào ung thư xương được biến đổi gen, được phát triển từ dòng tế bào U-2 OS của người, nổi tiếng với đặc tính tăng trưởng mạnh mẽ và ứng dụng rộng rãi trong các nghiên cứu sinh học. Dòng tế bào này đã được sửa đổi bằng công nghệ chỉnh sửa gen CRISPR/Cas9 để tích hợp protein huỳnh quang có thể chuyển đổi ánh sáng mMaple vào gen NUP96. Protein mMaple cho phép sử dụng các kỹ thuật hình ảnh tiên tiến như hình ảnh tế bào sống và kính hiển vi siêu phân giải, cung cấp cái nhìn động về hành vi của phức hợp lỗ nhân (NPC) và cơ chế vận chuyển nhập-xuất tế bào qua màng nhân.

Gen NUP96, mã hóa một thành phần quan trọng của NPC, là yếu tố thiết yếu cho vận chuyển nucleocytoplasmic. Sự biến đổi của NUP96 không chỉ ảnh hưởng đến các cơ chế vận chuyển mà còn đến cấu trúc và chức năng tổng thể của nhân. Do đó, dòng tế bào này là mô hình lý tưởng để nghiên cứu các bệnh lý liên quan đến NPC và vai trò của vận chuyển nhân trong chuyển hóa và tín hiệu tế bào. Việc tích hợp mMaple vào NUP96 cho phép theo dõi và quan sát động học của NUP96 theo thời gian thực trong cơ thể sống, trở thành công cụ không thể thiếu cho các nhà nghiên cứu tập trung vào nghiên cứu nhân tế bào và những người khám phá tác động của rối loạn NPC trong các bệnh như ung thư và nhiễm virus.

Với tư cách là một công cụ chuyên biệt, dòng tế bào U-2 OS-CRISPR-NUP96-mMaple số 16 hỗ trợ hình ảnh có độ phân giải cao và cung cấp dữ liệu đáng kể về phân bố không gian và thời gian của các thành phần NPC. Nó đặc biệt hữu ích cho các thí nghiệm yêu cầu phân tích chi tiết về biểu hiện gen, vị trí protein và vận chuyển nhân trong điều kiện sinh lý và bệnh lý, giúp hiểu sâu hơn về các quá trình tế bào ở cấp độ phân tử.

Tissue
Xương
Disease
U xương

02Classification

Organism
Human
Sex
Female
Growth properties
Adherent
GMO status
GMO-S1
GMO status details
GMO-S1: This human osteosarcoma cell line (U2OS-CRISPR-NUP96-mMaple, clone 16) contains a CRISPR-mediated NUP96-mMaple fusion enabling photoconvertible labeling of nuclear pore structures. The construct is stably present. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Biosafety level
1

03Identifiers

Citation
U-2 OS-CRISPR-NUP96-mMaple (Số catalog Cytion 300461)
NCBI TaxID
9606
Cellosaurus
CVCL_B7FK
Depositor
Phòng thí nghiệm Ellenberg (EMBL)

04Expression and susceptibility

Protein expression
NUP96-mMaple (protein phức hợp lỗ hạt nhân nội sinh 96, được gắn nhãn mMaple)

05Handling and culture

Culture medium
McCoys 5a, chứa: 3,0 g/L glucose, chứa: glutamine ổn định, chứa: 2,0 mM natri pyruvate, chứa: 2,2 g/L NaHCO₃ (Số hiệu sản phẩm Cytion 820200a)
Incubation atmosphere

37°C, 5%CO₂, môi trường ẩm.

Supplements
Bổ sung vào môi trường nuôi cấy 10% huyết thanh bò (FBS) và 1% NEAA
Dissociation reagent
Accutase
Subculturing
Loại bỏ môi trường nuôi cấy cũ khỏi các tế bào bám dính và rửa chúng bằng PBS không chứa canxi và magiê. Đối với bình T25, sử dụng 3-5 ml PBS, và đối với bình T75, sử dụng 5-10 ml. Sau đó, phủ hoàn toàn các tế bào bằng Accutase, sử dụng 1-2 ml cho bình T25 và 2,5 ml cho bình T75. Để tế bào ủ ở nhiệt độ phòng trong 8-10 phút để tách chúng ra. Sau khi ủ, nhẹ nhàng trộn tế bào với 10 ml môi trường để tái phân tán chúng, sau đó ly tâm ở 300xg trong 3 phút. Loại bỏ dịch trên, tái phân tán tế bào trong môi trường tươi và chuyển chúng vào các bình mới đã chứa môi trường tươi.
Seeding density
1 × 10⁴ tế bào/cm²
Fluid renewal
2 đến 3 lần mỗi tuần
Thawing and culturing
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

06Quality control and cryopreservation

Sterility

Sự nhiễm khuẩn Mycoplasma được loại trừ bằng cả các phương pháp xét nghiệm dựa trên PCR và các phương pháp phát hiện Mycoplasma dựa trên phát quang.

Để đảm bảo không có nhiễm khuẩn vi khuẩn, nấm hoặc men, các mẫu nuôi cấy tế bào được kiểm tra trực quan hàng ngày.

Freeze medium
Như một môi trường bảo quản đông lạnh, chúng tôi sử dụng môi trường tăng trưởng hoàn chỉnh (bao gồm FBS) + 10% DMSO để đảm bảo độ sống sau khi rã đông, hoặc CM-1 (mã sản phẩm Cytion 800100), bao gồm các chất bảo vệ thẩm thấu và chất ổn định chuyển hóa được tối ưu hóa để cải thiện quá trình phục hồi và giảm stress do đông lạnh gây ra.
Storage conditions

Để bảo quản lâu dài, hãy đặt ống nghiệm vào nitơ lỏng ở pha hơi ở nhiệt độ khoảng −150 đến −196 °C. Việc bảo quản ở −80 °C chỉ được chấp nhận như một bước trung gian ngắn hạn trước khi chuyển sang nitơ lỏng.

Shipping conditions

Các dòng tế bào được bảo quản bằng phương pháp đông lạnh được vận chuyển trên đá khô trong bao bì cách nhiệt đã được kiểm định, kèm theo lượng chất làm lạnh đủ để duy trì nhiệt độ khoảng −78 °C trong suốt quá trình vận chuyển. Khi nhận hàng, hãy kiểm tra ngay lập tức bao bì và chuyển các ống nghiệm sang nơi lưu trữ phù hợp mà không chậm trễ.

07Donor

Donor age
15 năm
Ethnicity
Người da trắng