Pāriet uz saturu
U-2 OS-CRISPR-NUP96-mMaple
Audums
Bone
Slimība
Osteosarkoma

Dokumenti

U-2 OS-CRISPR-NUP96-mMaple

Cell line · Preces numurs 300461

U-2 OS-CRISPR-NUP96-mMaple ir ģenētiski modificēta osteosarkomas šūnu līnija, kas iegūta no cilvēka U-2 OS šūnu līnijas, kura pazīstama ar savu spēcīgo augšanas...

€800.00bez nodokļa un piegādes izmaksām
Noliktavā
Lot
Ieteicams (jaunākā partija)
  • CoA
1

01Vispārīga informācija

Apraksts

U-2 OS-CRISPR-NUP96-mMaple ir ģenētiski modificēta osteosarkomas šūnu līnija, kas atvasināta no cilvēka U-2 OS šūnu līnijas, kas pazīstama ar savām spēcīgajām augšanas īpašībām un izmantojamību dažādos bioloģiskos pētījumos. Šis konkrētais klons ir modificēts, izmantojot CRISPR/Cas9 gēnu rediģēšanas tehnoloģiju, lai NUP96 gēnā iestrādātu mMaple - fotokonvertojamu fluorescējošu proteīnu. Proteīns mMaple ļauj izmantot progresīvas attēlveidošanas metodes, piemēram, dzīvās šūnas attēlveidošanu un superizšķirtspējas mikroskopiju, nodrošinot dinamisku ieskatu kodola poru kompleksa (NPC) uzvedībā un šūnu importa un eksporta mehānismos caur kodola apvalku.

NUP96 gēns, kas kodē svarīgu NPC komponentu, ir ļoti svarīgs nukleoplazmas transportam. NUP96 izmaiņas var ietekmēt ne tikai transporta mehānismus, bet arī vispārējo kodola arhitektūru un funkciju. Tādējādi šī šūnu līnija kalpo kā lielisks modelis ar NPC saistītu patoloģiju un kodola transporta lomas šūnu metabolismā un signalizācijā izpētei. MMaple integrēšana NUP96 ļauj reāllaika režīmā sekot līdzi NUP96 dinamikai un vizualizēt to in vivo, padarot to par neaizstājamu rīku pētniekiem, kas koncentrējas uz šūnu kodolu pētījumiem, un tiem, kas pēta NPC disfunkciju ietekmi uz tādām slimībām kā vēzis un vīrusu infekcijas.

Kā specializēts rīks U-2 OS-CRISPR-NUP96-mMaple klons Nr. 16 atbalsta augstas izšķirtspējas attēlveidošanu un sniedz būtiskus datus par NPC komponentu telpisko un laika sadalījumu. Tas ir īpaši vērtīgs eksperimentos, kuros nepieciešama detalizēta gēnu ekspresijas, proteīnu lokalizācijas un kodola transporta analīze fizioloģiskos un patoloģiskos apstākļos, veicinot dziļāku izpratni par šūnu procesiem molekulārā līmenī.

Audums
Bone
Slimība
Osteosarkoma

02Klasifikācija

Organisms
Cilvēks
Sekss
Sieviete
Augšanas īpašības
Atbalstītājs
ĢMO statuss
GMO-S1
Sīkāka informācija par ĢMO statusu
GMO-S1: This human osteosarcoma cell line (U2OS-CRISPR-NUP96-mMaple, clone 16) contains a CRISPR-mediated NUP96-mMaple fusion enabling photoconvertible labeling of nuclear pore structures. The construct is stably present. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Bioloģiskās drošības līmenis
1

03Identifikatori

Atsauce
U-2 OS-CRISPR-NUP96-mMaple (Cytion kataloga numurs 300461)
NCBI nodokļu identifikācijas numurs
9606
Cellosaurus
CVCL_B7FK
noguldītājs
Ellenberga laboratorija (EMBL)

04Pazīmes un uzņēmība

Proteīnu ekspresija
NUP96-mMaple (endogēnais kodola poru kompleksa proteīns 96, marķēts ar mMaple)

05Apstrāde un audzēšana

Barotne
McCoys 5a, w: 3,0 g/l glikoze, w: stabils glutamīns, w: 2,0 mM nātrija piruvāts, w: 2,2 g/l NaHCO3 (Cytion izstrādājuma numurs 820200a)
Inkubācijas vide

37°C, 5%CO2, mitrināta atmosfēra.

Papildinājumi
Papildināt barotni ar 10% FBS, 1% NEAA
Disociācijas reaģents
Accutase
Pārstādīšana
Noņemt veco barotni no pielipušajām šūnām un mazgāt tās ar PBS, kurā nav kalcija un magnija. T25 kolbām izmantojiet 3-5 ml PBS, bet T75 kolbām - 5-10 ml. Pēc tam pilnībā pārklājiet šūnas ar Accutase, izmantojot 1-2 ml T25 kolbām un 2,5 ml T75 kolbām. Ļaujiet šūnām inkubēties istabas temperatūrā 8-10 minūtes, lai tās atdalītos. Pēc inkubācijas uzmanīgi samaisiet šūnas ar 10 ml barotnes, lai tās atkārtoti suspendētu, pēc tam centrifugējiet 3 minūtes ar 300xg. Izmetiet supernatantu, atkārtoti suspendējiet šūnas svaigā barotnē un pārvietojiet tās jaunās kolbās, kurās jau ir svaiga barotne.
Sēšanas blīvums
1 x 104 šūnas/cm2
Šķidruma atjaunošana
2 līdz 3 reizes nedēļā
Atkausēšana un kultivēšana
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

06Kvalitātes kontrole un kriokonservācija

Sterilitāte

Mikoplazmas piesārņojums tiek izslēgts, izmantojot gan uz PCR balstītus testus, gan uz luminiscenci balstītas mikoplazmas noteikšanas metodes.

Lai pārliecinātos, ka nav baktēriju, sēnīšu vai rauga piesārņojuma, šūnu kultūras katru dienu vizuāli pārbauda.

Saldēšanas barotne
Kā kriokonservēšanas barotni mēs izmantojam pilnvērtīgu augšanas barotni (ieskaitot FBS) + 10 % DMSO, lai nodrošinātu pietiekamu dzīvotspēju pēc atkausēšanas, vai CM-1 (Cytion kataloga numurs 800100), kas ietver optimizētus osmoprotektorus un metaboliskos stabilizatorus, lai uzlabotu atveseļošanos un samazinātu krioinducēto stresu.
Uzglabāšanas nosacījumi

Ilgstošai uzglabāšanai flakonus ievietojiet šķidrā slāpeklī ar tvaika fāzi aptuveni -150 līdz -196 °C temperatūrā. Uzglabāšana -80 °C temperatūrā ir pieļaujama tikai kā īss starpposms pirms pārvietošanas uz šķidro slāpekli.

Piegādes nosacījumi

Kriokonservētas šūnu līnijas tiek sūtītas uz sausā ledus apstiprinātā, izolētā iepakojumā ar pietiekamu dzesēšanas šķidruma daudzumu, lai visā transportēšanas laikā uzturētu aptuveni -78 °C temperatūru. Pēc saņemšanas nekavējoties pārbaudiet iepakojumu un nekavējoties pārvietojiet flakonus uz atbilstošu uzglabāšanas vietu.

07Ziedotājs

Donora vecums
15 gadi
Etniskā piederība
Kaukāzietis