الانتقال إلى المحتوى
U-2 OS-CRISPR-NUP96-mMaple
الأنسجة
العظام
المرض
الساركوما العظمية العظمية

المستندات

U-2 OS-CRISPR-NUP96-mMaple

Cell line · رقم المنتج 300461

يُعد U-2 OS-CRISPR-NUP96-mMaple خط خلايا لورم العظم الساركومي مُعدَّل وراثيًّا، مشتقًّا من خط الخلايا البشرية U-2 OS، المعروف بنموه القوي...

€800.00باستثناء الضريبة وتكاليف الشحن
متوفر
لوت
موصى بها (أحدث دفعة)
  • CoA
1

01معلومات عامة

الوصف

إن سلالة U-2 OS-CRISPR-NUP96-mMaple هي سلالة خلايا ساركوما عظمية معدلة وراثياً مشتقة من خط خلايا U-2 OS البشرية المعروفة بخصائص نموها القوية وفائدتها في مختلف الدراسات البيولوجية. وقد تم تعديل هذا المستنسخ الخاص باستخدام تقنية التعديل الجيني CRISPR/Cas9 لدمج بروتين mMaple، وهو بروتين فلوري قابل للتحويل الضوئي، في جين NUP96. ويسمح بروتين mMaple بتقنيات تصوير متقدمة مثل التصوير الخلوي الحي والفحص المجهري فائق الدقة، مما يوفر رؤى ديناميكية لسلوك مجمع المسام النووية وآليات الاستيراد والتصدير الخلوي عبر الغلاف النووي.

ويُعد جين NUP96، الذي يشفر أحد المكونات الأساسية للمركب النووي البلمي، عنصراً حيوياً في نقل البلازما النووية. ويمكن أن يؤثر تغيير الجين NUP96 ليس فقط على آليات النقل ولكن أيضاً على البنية والوظيفة النووية الشاملة. وبالتالي، يُستخدم هذا الخط الخلوي كنموذج ممتاز لدراسة الأمراض المرتبطة بالنقل النووي الخلوي ودور النقل النووي في عملية الأيض الخلوي والإشارات. ويسمح دمج mMaple في NUP96 بتتبع وتصور ديناميكيات NUP96 في الوقت الحقيقي في الجسم الحي، مما يجعله أداة لا غنى عنها للباحثين الذين يركزون على دراسات نواة الخلية وأولئك الذين يستكشفون الآثار المترتبة على اختلالات وظائف NPC في أمراض مثل السرطان والعدوى الفيروسية.

وباعتباره أداة متخصصة، يدعم استنساخ U-2 OS-CRISPR-NUP96-mMaple رقم 16 التصوير عالي الدقة ويوفر بيانات جوهرية فيما يتعلق بالتوزيع المكاني والزماني لمكونات NPC. وهو ذو قيمة خاصة للتجارب التي تتطلب تحليلاً مفصلاً للتعبير الجيني وتوطين البروتين والنقل النووي في ظل الظروف الفسيولوجية والمرضية، مما يسهل فهماً أعمق للعمليات الخلوية على المستوى الجزيئي.

الأنسجة
العظام
المرض
الساركوما العظمية العظمية

02التصنيف

كائن حي
إنسان
الجنس
أنثى
خصائص النمو
الملتزم
حالة الكائنات المعدلة وراثيًا
GMO-S1
تفاصيل حالة الكائنات المعدلة وراثيًا
GMO-S1: This human osteosarcoma cell line (U2OS-CRISPR-NUP96-mMaple, clone 16) contains a CRISPR-mediated NUP96-mMaple fusion enabling photoconvertible labeling of nuclear pore structures. The construct is stably present. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
مستوى السلامة البيولوجية
1

03المعرّفات

المرجع
U-2 OS-CRISPR-NUP96-mMaple (كتالوج سيتيون رقم 300461)
رقم التعريف الضريبي لدى NCBI
9606
سيلوصور
CVCL_B7FK
المودع
مختبر إلينبرغ (EMBL)

04التعبير والقابلية للإصابة

التعبير البروتيني
NUP96-mMaple (بروتين المسام النووي المعقد 96، موسوم بوسم mMaple)

05التعامل مع النباتات وزراعتها

وسط الاستزراع
مكويز 5 أ، ث: 3.0 جم/لتر جلوكوز، ث: جلوتامين مستقر، ث: 2.0 ملي مولار بيروفات الصوديوم، ث: 2.2 جم/لتر NaHCO3 (رقم المادة 820200 أ)
بيئة الحضانة

37 درجة مئوية، و5% من ثاني أكسيد الكربون في جو مرطب.

المكملات الغذائية
يُضاف إلى الوسط 10٪ FBS، 1٪ NEAA
كاشف التفكك
أكوتاس
إعادة الاستنبات
قم بإزالة الوسط القديم من الخلايا الملتصقة واغسلها باستخدام PBS الذي يفتقر إلى الكالسيوم والمغنيسيوم. بالنسبة لقوارير T25، استخدم 3-5 مل من PBS، وبالنسبة لقوارير T75، استخدم 5-10 مل. ثم، قم بتغطية الخلايا بالكامل باستخدام أكوتاز، باستخدام 1-2 مل لقوارير T25 و2.5 مل لقوارير T75. دع الخلايا تحتضن في درجة حرارة الغرفة لمدة 8-10 دقائق لفصلها. بعد الحضانة، اخلط الخلايا برفق مع 10 مل من الوسط لإعادة ترسيبها، ثم اطردها مركزيًا بسرعة 300xg لمدة 3 دقائق. تخلص من المادة الطافية، وأعد غمر الخلايا في وسط جديد وانقلها إلى قوارير جديدة تحتوي بالفعل على وسط جديد.
كثافة البذر
1 × 104 خلية/سم2
تجديد السوائل
2 إلى 3 مرات في الأسبوع
إذابة الثلج والزراعة
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

06مراقبة الجودة والحفظ بالتبريد

العقم

يُستبعد التلوث بالميكوبلازما باستخدام كل من المقايسات القائمة على تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) وطرق الكشف عن الميكوبلازما القائمة على التألق.

ولضمان عدم وجود تلوث بكتيري أو فطري أو خميرة يتم إخضاع مزارع الخلايا للفحص البصري اليومي.

وسط التجميد
كوسيط للحفظ بالتبريد، نستخدم وسط نمو كامل (بما في ذلك FBS) + 10% DMSO من أجل الحفاظ على حيوية كافية بعد ذوبان الجليد أو CM-1 (كتالوج Cytion رقم 800100)، والذي يتضمن مواد حماية أسموزموبيروتيكتية ومثبتات أيضية مُحسّنة لتعزيز التعافي وتقليل الإجهاد الناجم عن التبريد.
شروط التخزين

للحفظ طويل الأمد، ضع القوارير في نيتروجين سائل في طور البخار عند درجة حرارة تتراوح بين -150 و -196 درجة مئوية تقريباً. يُقبل التخزين عند درجة حرارة -80 درجة مئوية فقط كخطوة مؤقتة قصيرة قبل النقل إلى النيتروجين السائل.

شروط الشحن

تُشحن خطوط الخلايا المحفوظة بالتبريد على ثلج جاف في عبوات معزولة وموثوقة مع مبرد كافٍ للحفاظ على درجة حرارة -78 درجة مئوية تقريبًا طوال فترة النقل. عند الاستلام، افحص الحاوية على الفور وانقل القوارير دون تأخير إلى المخزن المناسب.

07المانح

عمر المتبرع
15 سنة
الأصل العرقي
قوقازي

قد تحتاج أيضًا إلى