U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup133

U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup133 هو خط خلايا سرطانية عظمية بشرية معدلة وراثيًا مشتق من الخلفية الأصلية U2OS، حيث تم تعديل الموقع الجيني NUP133 الداخلي باستخدام تقنية CRISPR/Cas9 لتعديل الجينوم لترميز علامة SNAPf الطرفية C. NUP133 هو مكون أساسي في مركب Y (مركب NUP107-160)، وهو مركب فرعي هيكلي ضروري لتجميع مركب المسام النووية (NPC) وصيانته. من خلال إدخال تسلسل ترميز SNAPf في الإطار في الموقع الداخلي، يتم التعبير عن البروتين المدمج تحت التحكم التنظيمي الأصلي، مما يحافظ على مستويات التعبير الفسيولوجي والتوطين تحت الخلوي.

علامة SNAPf هي متغير سريع التسمية لعلامة SNAP، وهو O6-alkylguanine-DNA alkyltransferase مهندس يتفاعل تساهميًا مع ركائز مقترنة بالبنزيلغوانين. وهذا يتيح تسمية فلورية عالية التحديد ومتعددة الاستخدامات لـ Nup133 في الخلايا الحية أو الثابتة باستخدام ركائز SNAP قابلة للنفاذ أو غير قابلة للنفاذ. في خلايا U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup133، يتوطّن البروتين المدمج في الغلاف النووي بنمط نقطي مميز لمجمعات المسام النووية. ونظرًا لأن التوسيم يحدث في الموقع الداخلي، فإن التوازن الكيميائي والهيكلية لمجمعات المسام النووية تتأثران بشكل طفيف، مما يجعل هذا النموذج مناسبًا للمجهر الكمي فائق الدقة، وتتبع الجزيء الواحد، والتحليلات الحركية لتجميع مجمعات المسام النووية وتجددها.

يوفر هذا الخط الخلوي منصة قوية لدراسة النقل النووي، وديناميكيات النقل النووي-السيتوبلازمي، وتكوين NPC خلال الطور البيني وإعادة التجميع النووي بعد الانقسام، والتنظيم الهيكلي لمركب Y داخل هيكل المسام. توفر خلفية U2OS شكلًا مسطحًا ونوى كبيرة، مما يسهل التصوير عالي الدقة. تعد خلايا U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup133 مناسبة بشكل خاص لتجارب وضع العلامات باستخدام تقنية pulse-chase، والمجهر الضوئي والإلكتروني الترابطي، وأساليب التصوير متعدد الألوان بالاقتران مع نوكليوبورينات أو عوامل نقل إضافية موصومة داخليًا.

37 درجة مئوية، و5% من _ثاني أكسيد الكربون في جو مرطب.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

يُستبعد التلوث بالميكوبلازما باستخدام كل من المقايسات القائمة على تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) وطرق الكشف عن الميكوبلازما القائمة على التألق.

ولضمان عدم وجود تلوث بكتيري أو فطري أو خميرة يتم إخضاع مزارع الخلايا للفحص البصري اليومي.

للحفظ طويل الأمد، ضع القوارير في نيتروجين سائل في طور البخار عند درجة حرارة تتراوح بين -150 و -196 درجة مئوية تقريباً. يُقبل التخزين عند درجة حرارة -80 درجة مئوية فقط كخطوة مؤقتة قصيرة قبل النقل إلى النيتروجين السائل.

تُشحن خطوط الخلايا المحفوظة بالتبريد على ثلج جاف في عبوات معزولة وموثوقة مع مبرد كافٍ للحفاظ على درجة حرارة -78 درجة مئوية تقريبًا طوال فترة النقل. عند الاستلام، افحص الحاوية على الفور وانقل القوارير دون تأخير إلى المخزن المناسب.

في Cytion، نلتزم في Cytion بجودة منتجاتنا وحيويتها. نحن نضمن أن تكون خلايانا قابلة للحياة في بداية الاستزراع لمدة 60 يومًا بعد الشحن من منشآتنا. نؤكد أن جميع المواد مطابقة للمواصفات الموضحة في شهادة التحليل و/أو ورقة المنتج

للحصول على التفاصيل الكاملة، يُرجى الرجوع إلى <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">بيان الضمان