U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup133

U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup133, ebeveyn U2OS arka planından türetilmiş, genetik olarak mühendislik uygulanmış bir insan osteosarkom hücre hattıdır. Bu hücre hattında, endojen NUP133 lokusu, CRISPR/Cas9 aracılı genom düzenleme kullanılarak C-terminal SNAPf etiketini kodlayacak şekilde modifiye edilmiştir. NUP133, nükleer por kompleksi (NPC) montajı ve bakımı için gerekli olan yapısal bir alt kompleks olan Y-kompleksinin (NUP107-160 kompleksi) temel bir bileşenidir. SNAPf kodlama dizisini endojen lokusa çerçeve içinde sokarak, füzyon proteini doğal düzenleyici kontrol altında ifade edilir ve fizyolojik ifade seviyeleri ve subselüler lokalizasyon korunur.

SNAPf etiketi, benzylguinin konjuge substratlarla kovalent reaksiyona giren, mühendislik ürünü bir O6-alkilguanin-DNA alkiltransferaz olan SNAP etiketinin hızlı etiketleme varyantıdır. Bu, hücre geçirgen veya geçirgen olmayan SNAP substratları kullanılarak canlı veya sabit hücrelerde Nup133'ün yüksek oranda spesifik ve çok yönlü floresan etiketlemesini mümkün kılar. U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup133 hücrelerinde, füzyon proteini, nükleer gözenek komplekslerinin karakteristik noktalı deseninde nükleer zarfta lokalize olur. Etiketleme endojen lokusta gerçekleştiğinden, NPC stokiyometrisi ve mimarisi minimum düzeyde bozulur, bu da bu modeli kantitatif süper çözünürlüklü mikroskopi, tek molekül izleme ve NPC montajı ve dönüşümünün kinetik analizleri için uygun hale getirir.

Bu hücre hattı, nükleer taşıma, nükleositoplazmik trafik dinamikleri, interfaz ve post-mitotik nükleer yeniden birleşme sırasında NPC biyogenezi ve gözenek iskeleti içindeki Y-kompleksinin yapısal organizasyonunu incelemek için sağlam bir platform sağlar. U2OS arka planı, düz morfoloji ve büyük çekirdekler sunarak yüksek çözünürlüklü görüntülemeyi kolaylaştırır. U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup133 hücreleri, ek endojen etiketli nükleoporinler veya taşıma faktörleri ile birlikte puls-chase etiketleme deneyleri, korelatif ışık ve elektron mikroskobu ve çok renkli görüntüleme yaklaşımları için özellikle uygundur.

37°C, %5_CO2, nemlendirilmiş atmosfer.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Mikoplazma kontaminasyonu hem PCR tabanlı tahliller hem de lüminesans tabanlı mikoplazma tespit yöntemleri kullanılarak dışlanır.

Bakteriyel, fungal veya maya kontaminasyonu olmadığından emin olmak için hücre kültürleri günlük görsel incelemelere tabi tutulur.

Uzun süreli muhafaza için flakonları yaklaşık -150 ila -196 °C'de buhar fazlı sıvı nitrojen içine yerleştirin. 80 °C'de saklama yalnızca sıvı nitrojene aktarılmadan önce kısa bir ara adım olarak kabul edilebilir.

Kriyoprezerve edilmiş hücre hatları, nakliye boyunca yaklaşık -78 °C'yi korumak için yeterli soğutucu akışkan içeren, onaylanmış, yalıtılmış ambalajlarda kuru buz üzerinde gönderilir. Teslim aldığınızda, kabı hemen inceleyin ve flakonları gecikmeden uygun depoya aktarın.

Cytion olarak ürünlerimizin kalitesinin ve canlılığının arkasındayız. Hücrelerimizin, tesislerimizden sevkiyattan sonra 60 gün boyunca kültürün başlangıcında canlı olacağını garanti ediyoruz. Tüm malzemelerin Analiz Sertifikası ve/veya Ürün Sayfasında açıklanan özelliklere uygun olduğunu garanti ediyoruz

Tüm ayrıntılar için lütfen <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Garanti Beyanımıza bakın