U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup133

U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup133 — це генетично модифікована лінія клітин остеосаркоми людини, отримана з батьківської лінії U2OS, в якій ендогенний локус NUP133 був модифікований за допомогою редагування геному за допомогою CRISPR/Cas9 для кодування C-кінцевого тегу SNAPf. NUP133 є основним компонентом Y-комплексу (комплекс NUP107-160), структурного субкомплексу, необхідного для складання та підтримки ядерного пористого комплексу (NPC). Шляхом введення кодуючої послідовності SNAPf в ендогенний локус, фузійний білок експресується під нативним регуляторним контролем, зберігаючи фізіологічні рівні експресії та субклітинну локалізацію.

Мітка SNAPf є варіантом швидкого маркування мітки SNAP, інженерно сконструйованої O6-алкілгуанін-ДНК-алкілтрансферази, яка ковалентно реагує з бензилгуанін-кон'югованими субстратами. Це дозволяє здійснювати високоспецифічне та універсальне флуоресцентне маркування Nup133 у живих або фіксованих клітинах за допомогою клітинно-проникних або непроникних субстратів SNAP. У клітинах U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup133 фузійний білок локалізується в ядерній оболонці у вигляді крапчастих утворень, характерних для ядерних пористих комплексів. Оскільки мічення відбувається в ендогенному локусі, стехіометрія та архітектура NPC мінімально порушуються, що робить цю модель придатною для кількісної мікроскопії надвисокої роздільної здатності, відстеження окремих молекул та кінетичного аналізу складання та обороту NPC.

Ця клітинна лінія забезпечує надійну платформу для вивчення ядерного транспорту, динаміки ядерно-цитоплазматичного трафіку, біогенезу NPC під час інтерфази та постмітотичного ядерного перезбирання, а також структурної організації Y-комплексу в пористій каркасній структурі. Фон U2OS забезпечує плоску морфологію та великі ядра, що полегшує отримання зображень з високою роздільною здатністю. Клітини U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup133 особливо добре підходять для експериментів з міткою імпульс-переслідування, кореляційної світлової та електронної мікроскопії, а також багатоколірних методів візуалізації в поєднанні з додатковими ендогенно міченими нуклеопоринами або транспортними факторами.

37°C, 5% _CO2, волога атмосфера.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Зараження мікоплазмою виключається за допомогою аналізів на основі ПЛР та люмінесцентних методів виявлення мікоплазми.

Щоб переконатися у відсутності бактеріального, грибкового або дріжджового забруднення, клітинні культури піддаються щоденному візуальному контролю.

Для тривалого зберігання помістіть флакони в парофазний рідкий азот при температурі від -150 до -196 °C. Зберігання при -80 °C допустиме лише як короткий проміжний етап перед перенесенням у рідкий азот.

Кріоконсервовані клітинні лінії транспортуються на сухому льоду в перевіреній ізольованій упаковці з достатньою кількістю холодоагенту для підтримання температури приблизно -78 °C під час транспортування. При отриманні негайно огляньте контейнер і без зволікань перемістіть флакони у відповідне місце зберігання.

У Cytion ми відповідаємо за якість та життєздатність нашої продукції. Ми гарантуємо, що наші клітини будуть життєздатними на початку культивування протягом 60 днів після відвантаження з нашого заводу. Ми запевняємо, що всі матеріали відповідають специфікаціям, описаним у сертифікаті аналізу та/або паспорті продукту

Для отримання більш детальної інформації, будь ласка, зверніться до нашого <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Заяви про гарантію</a>