U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup133

U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup133 הוא קו תאים של אוסטאוסרקומה אנושית מהונדסת גנטית, שמקורו ברקע ההורי U2OS, שבו לוקוס NUP133 האנדוגני שונה באמצעות עריכת גנום בתיווך CRISPR/Cas9 כדי לקודד תגית SNAPf C-terminal. NUP133 הוא מרכיב מרכזי במתחם Y (מתחם NUP107-160), תת-מתחם מבני חיוני להרכבה ולתחזוקה של מתחם נקבוביות גרעיניות (NPC). על ידי החדרת רצף הקוד של SNAPf בתוך המסגרת בלוקוס האנדוגני, החלבון הממוזג מבוטא תחת בקרה רגולטורית טבעית, תוך שמירה על רמות ביטוי פיזיולוגיות ולוקליזציה תת-תאית.

התג SNAPf הוא גרסה מהירה לסימון של התג SNAP, O6-alkylguanine-DNA alkyltransferase מהונדס המגיב קוולנטית עם מצעים מצומדים לבנזילגואנין. זה מאפשר סימון פלואורסצנטי ספציפי ורב-תכליתי של Nup133 בתאים חיים או קבועים באמצעות מצעי SNAP חדירים או אטומים לתאים. בתאי U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup133, החלבון הממוזג מתמקם במעטפת הגרעין בתבנית נקודתית האופיינית למתחמי נקבוביות גרעיניות. מכיוון שהתיוג מתרחש בלוקוס האנדוגני, הסטוכיומטריה והארכיטקטורה של NPC מופרעות במינימום, מה שהופך מודל זה למתאים למיקרוסקופיה כמותית ברזולוציה גבוהה, מעקב אחר מולקולה בודדת וניתוחים קינטיים של הרכבת NPC ותחלופתו.

קו תאים זה מספק פלטפורמה איתנה לחקר הובלה גרעינית, דינמיקת תנועה גרעינית-ציטופלזמית, ביוגנזה של NPC במהלך שלב הביניים והרכבה מחדש של הגרעין לאחר המיטוזה, וארגון מבני של קומפלקס Y בתוך שלד הנקבוביות. רקע ה-U2OS מציע מורפולוגיה שטוחה וגרעינים גדולים, מה שמקל על הדמיה ברזולוציה גבוהה. תאי U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup133 מתאימים במיוחד לניסויי תיוג פולס-צ'ייס, מיקרוסקופיה קורלטיבית של אור ואלקטרונים, וגישות הדמיה רב-צבעיות בשילוב עם נוקליופורינים או גורמי הובלה מתויגים אנדוגנית נוספים.

37°C, 5%_CO2, אווירה לחה.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

זיהום במיקופלסמה נשלל באמצעות בדיקות מבוססות PCR ושיטות זיהוי מיקופלסמה מבוססות לומניסצנציה.

כדי להבטיח שאין זיהום חיידקי, פטרייתי או שמרי, תרבויות התאים עוברות בדיקות ויזואליות יומיות.

לשימור לטווח ארוך, יש להניח את הבקבוקונים בחנקן נוזלי במצב של אדי בטמפרטורה של כ-150 עד 196 מעלות צלזיוס. אחסון בטמפרטורה של 80 מעלות צלזיוס מקובל רק כצעד ביניים קצר לפני העברה לחנקן נוזלי.

שורות תאים שהוקפאו נשלחות בקרח יבש באריזה מאושרת ומבודדת עם כמות מספקת של חומר קירור כדי לשמור על טמפרטורה של כ-78°C- במהלך ההובלה. עם קבלת המשלוח, יש לבדוק את המכל מיד ולהעביר את הבקבוקונים ללא דיחוי לאחסון מתאים.

ב-Cytion, אנו עומדים מאחורי האיכות והכדאיות של המוצרים שלנו. אנו מבטיחים שתאינו יהיו קיימים בתחילת התרבית למשך 60 יום לאחר המשלוח מהמתקנים שלנו. אנו מבטיחים שכל החומרים תואמים למפרטים המתוארים בתעודת הניתוח ו/או בדף המוצר.

לפרטים מלאים, אנא עיינו ב <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">הצהרת האחריות שלנו