U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup133

U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup133 je gensko spremenjena človeška osteosarkomna celična linija, pridobljena iz starševskega ozadja U2OS, v kateri je bil endogeni lokus NUP133 spremenjen z uporabo CRISPR/Cas9-posredovanega urejanja genoma, da kodira C-terminalni SNAPf-oznako. NUP133 je osrednja komponenta Y-kompleksa (kompleks NUP107-160), strukturni podkompleks, ki je bistven za sestavo in vzdrževanje jedrskega por kompleksa (NPC). Z uvedbo kodirne sekvence SNAPf v okviru endogenega lokusa se fuzijski protein izraža pod naravnim regulativnim nadzorom, pri čemer se ohranijo fiziološke ravni izražanja in subcelularna lokalizacija.

Oznaka SNAPf je hitro označevalna različica oznake SNAP, inženirano O6-alkilguanin-DNA alkiltransferazo, ki kovalentno reagira s substrati, konjugiranimi z benzilguaninom. To omogoča visoko specifično in vsestransko fluorescenčno označevanje Nup133 v živih ali fiksiranih celicah z uporabo celično prepustnih ali neprepustnih SNAP substratov. V celicah U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup133 se fuzijski protein lokalizira v jedrski ovojnici v pikastem vzorcu, značilnem za jedrske porne komplekse. Ker se označevanje odvija na endogenem lokusu, sta stehiometrija in arhitektura NPC minimalno moteni, kar ta model naredi primernega za kvantitativno mikroskopijo z visoko ločljivostjo, sledenje posameznih molekul in kinetične analize sestavljanja in obnove NPC.

Ta celična linija zagotavlja robustno platformo za preučevanje jedrskega transporta, dinamike nukleocitoplazmatskega prometa, biogeneze NPC med interfazo in postmitotičnim ponovnim sestavljanjem jedra ter strukturne organizacije Y-kompleksa znotraj pore. Ozadje U2OS ponuja ravno morfologijo in velika jedra, kar olajšuje slikanje z visoko ločljivostjo. Celice U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup133 so še posebej primerne za eksperimente označevanja s pulzno-zasledovanjem, korelacijsko svetlobno in elektronsko mikroskopijo ter večbarvne slikanje v kombinaciji z dodatnimi endogeno označenimi nukleoporini ali transportnimi faktorji.

37 °C, 5 %_CO2, vlažno ozračje.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Kontaminacija z mikoplazmo se izključi z uporabo testov na podlagi PCR in metod za odkrivanje mikoplazme na podlagi luminiscence.

Da se zagotovi, da ni kontaminacije z bakterijami, glivami ali kvasovkami, se celične kulture dnevno vizualno pregledujejo.

Za dolgotrajno shranjevanje viale postavite v tekoči dušik v parni fazi pri približno -150 do -196 °C. Shranjevanje pri -80 °C je sprejemljivo le kot kratek vmesni korak pred prenosom v tekoči dušik.

Kriokonzervirane celične linije se pošiljajo na suhem ledu v potrjeni, izolirani embalaži z zadostno količino hladilnega sredstva, da se med prevozom vzdržuje približno -78 °C. Ob prejemu takoj preglejte embalažo in viale nemudoma prenesite v ustrezno skladišče.

V podjetju Cytion stojimo za kakovostjo in uporabnostjo svojih izdelkov. Zagotavljamo, da bodo naše celice ob začetku gojenja še 60 dni po odpremi iz naših obratov vitalne. Zagotavljamo, da so vsi materiali skladni s specifikacijami, opisanimi v potrdilu o analizi in/ali listu izdelka

Za vse podrobnosti si oglejte našo <a href=""/Kdo smo/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Garancijsko izjavo