U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup133

U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup133 là dòng tế bào ung thư xương người được biến đổi gen, được phát triển từ dòng tế bào gốc U2OS, trong đó locus NUP133 nội sinh đã được sửa đổi bằng công nghệ chỉnh sửa gen CRISPR/Cas9 để mã hóa một thẻ SNAPf ở đầu C-terminal. NUP133 là thành phần chính của phức hợp Y (phức hợp NUP107-160), một phức hợp cấu trúc quan trọng cho quá trình lắp ráp và duy trì phức hợp lỗ nhân (NPC). Bằng cách đưa trình tự mã hóa SNAPf vào vị trí nội sinh, protein liên hợp được biểu hiện dưới sự điều khiển quy định tự nhiên, duy trì mức biểu hiện sinh lý và vị trí trong tế bào.

Thẻ SNAPf là biến thể gắn nhãn nhanh của thẻ SNAP, một enzym O6-alkylguanine-DNA alkyltransferase được thiết kế để phản ứng cộng hóa trị với các chất nền được liên kết với benzylguanine. Điều này cho phép gắn nhãn huỳnh quang đặc hiệu và linh hoạt cho Nup133 trong tế bào sống hoặc cố định bằng cách sử dụng các chất nền SNAP có khả năng xuyên màng hoặc không xuyên màng. Trong tế bào U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup133, protein liên hợp định vị tại vỏ nhân theo mô hình chấm đặc trưng của phức hợp lỗ nhân. Vì quá trình gắn thẻ diễn ra tại vị trí nội sinh, tỷ lệ và cấu trúc của phức hợp lỗ nhân (NPC) ít bị xáo trộn, khiến mô hình này phù hợp cho các phân tích siêu phân giải định lượng, theo dõi phân tử đơn và phân tích động học về quá trình lắp ráp và thoái hóa của NPC.

Dòng tế bào này cung cấp một nền tảng mạnh mẽ để nghiên cứu vận chuyển nhân, động học vận chuyển nhân-chất tế bào, quá trình sinh tổng hợp NPC trong giai đoạn interphase và tái tổ hợp nhân sau phân bào, cũng như tổ chức cấu trúc của phức hợp Y trong khung lỗ nhân. Nền tảng U2OS có hình thái phẳng và nhân lớn, thuận lợi cho việc chụp ảnh độ phân giải cao. Các tế bào U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup133 đặc biệt phù hợp cho các thí nghiệm đánh dấu xung-theo dõi, kính hiển vi ánh sáng và điện tử tương quan, cũng như các phương pháp chụp ảnh đa màu kết hợp với các protein lỗ nhân hoặc yếu tố vận chuyển được gắn thẻ nội sinh khác.

37°C, 5%_CO₂, môi trường ẩm.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Sự nhiễm khuẩn Mycoplasma được loại trừ bằng cả các phương pháp xét nghiệm dựa trên PCR và các phương pháp phát hiện Mycoplasma dựa trên phát quang.

Để đảm bảo không có nhiễm khuẩn vi khuẩn, nấm hoặc men, các mẫu nuôi cấy tế bào được kiểm tra trực quan hàng ngày.

Để bảo quản lâu dài, hãy đặt ống nghiệm vào nitơ lỏng ở pha hơi ở nhiệt độ khoảng −150 đến −196 °C. Việc bảo quản ở −80 °C chỉ được chấp nhận như một bước trung gian ngắn hạn trước khi chuyển sang nitơ lỏng.

Các dòng tế bào được bảo quản bằng phương pháp đông lạnh được vận chuyển trên đá khô trong bao bì cách nhiệt đã được kiểm định, kèm theo lượng chất làm lạnh đủ để duy trì nhiệt độ khoảng −78 °C trong suốt quá trình vận chuyển. Khi nhận hàng, hãy kiểm tra ngay lập tức bao bì và chuyển các ống nghiệm sang nơi lưu trữ phù hợp mà không chậm trễ.

Tại Cytion, chúng tôi cam kết về chất lượng và khả năng sống của các sản phẩm của mình. Chúng tôi đảm bảo rằng các tế bào của chúng tôi sẽ có khả năng sống tại thời điểm bắt đầu nuôi cấy trong 60 ngày kể từ khi vận chuyển từ cơ sở của chúng tôi. Chúng tôi cam kết rằng tất cả các vật liệu tuân thủ các thông số kỹ thuật được mô tả trong Giấy chứng nhận phân tích và/hoặc Tài liệu sản phẩm.

Để biết chi tiết đầy đủ, vui lòng tham khảo <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Tuyên bố Bảo hành.