U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup133

Το U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup133 είναι μια γενετικά τροποποιημένη ανθρώπινη κυτταρική σειρά οστεοσαρκώματος που προέρχεται από το γονικό υπόβαθρο U2OS, στο οποίο ο ενδογενής τόπος NUP133 έχει τροποποιηθεί χρησιμοποιώντας γονιδιακή επεξεργασία με τη μεσολάβηση CRISPR/Cas9 για την κωδικοποίηση μιας ετικέτας SNAPf C-τερματικού. Το NUP133 είναι ένα βασικό συστατικό του συμπλέγματος Y (σύμπλεγμα NUP107-160), ενός δομικού υποσυμπλέγματος απαραίτητου για τη συναρμολόγηση και τη συντήρηση του συμπλέγματος πυρηνικών πόρων (NPC). Με την εισαγωγή της αλληλουχίας κωδικοποίησης SNAPf στο ενδογενές locus, η πρωτεΐνη σύντηξης εκφράζεται υπό φυσιολογικό ρυθμιστικό έλεγχο, διατηρώντας τα φυσιολογικά επίπεδα έκφρασης και την υποκυτταρική εντοπισμό.

Η ετικέτα SNAPf είναι μια παραλλαγή ταχείας επισήμανσης της ετικέτας SNAP, μιας μηχανικής O6-αλκυλογουανίνη-DNA αλκυλτρανσφεράσης που αντιδρά ομοιοπολικά με υποστρώματα συζευγμένα με βενζυλογουανίνη. Αυτό επιτρέπει την εξαιρετικά ειδική και ευέλικτη φθορίζουσα επισήμανση του Nup133 σε ζωντανά ή σταθερά κύτταρα χρησιμοποιώντας υποστρώματα SNAP διαπερατά ή αδιαπέραστα από τα κύτταρα. Στα κύτταρα U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup133, η πρωτεΐνη σύντηξης εντοπίζεται στο πυρηνικό περίβλημα με ένα χαρακτηριστικό διάστικτο μοτίβο των πυρηνικών πόρων. Επειδή η σήμανση πραγματοποιείται στον ενδογενή τόπο, η στοιχειομετρία και η αρχιτεκτονική των NPC διαταράσσονται ελάχιστα, καθιστώντας αυτό το μοντέλο κατάλληλο για ποσοτική μικροσκοπία υπερ-ανάλυσης, παρακολούθηση μορίων και κινητικές αναλύσεις της συναρμολόγησης και της ανανέωσης των NPC.

Αυτή η κυτταρική σειρά παρέχει μια ισχυρή πλατφόρμα για τη μελέτη της πυρηνικής μεταφοράς, της δυναμικής της πυρηνικοκυτταρικής κυκλοφορίας, της βιογένεσης NPC κατά τη διάρκεια της μεσοφάσης και της μετα-μιτωτικής πυρηνικής ανασυγκρότησης, καθώς και της δομικής οργάνωσης του συμπλέγματος Y εντός του πλέγματος πόρων. Το υπόβαθρο U2OS προσφέρει επίπεδη μορφολογία και μεγάλους πυρήνες, διευκολύνοντας την απεικόνιση υψηλής ανάλυσης. Τα κύτταρα U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup133 είναι ιδιαίτερα κατάλληλα για πειράματα σήμανσης pulse-chase, συσχετιστική μικροσκοπία φωτός και ηλεκτρονίων, καθώς και προσεγγίσεις πολύχρωμης απεικόνισης σε συνδυασμό με επιπλέον ενδογενώς σημασμένες νουκλεοπ

37°C, 5%_CO2, υγροποιημένη ατμόσφαιρα.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Η μόλυνση από μυκόπλασμα αποκλείεται με τη χρήση τόσο των δοκιμασιών που βασίζονται στην PCR όσο και των μεθόδων ανίχνευσης μυκοπλάσματος με βάση τη φωταύγεια.

Για να διασφαλιστεί ότι δεν υπάρχει μόλυνση από βακτήρια, μύκητες ή ζύμες, οι κυτταροκαλλιέργειες υποβάλλονται σε καθημερινές οπτικές επιθεωρήσεις.

Για μακροχρόνια συντήρηση, τοποθετήστε τα φιαλίδια σε υγρό άζωτο σε φάση ατμών σε θερμοκρασία περίπου -150 έως -196 °C. Η αποθήκευση στους -80 °C είναι αποδεκτή μόνο ως σύντομο ενδιάμεσο βήμα πριν από τη μεταφορά σε υγρό άζωτο.

Οι κρυοσυντηρημένες κυτταρικές σειρές αποστέλλονται σε ξηρό πάγο σε επικυρωμένη, μονωμένη συσκευασία με επαρκές ψυκτικό μέσο για τη διατήρηση περίπου των -78 °C καθ' όλη τη διάρκεια της μεταφοράς. Κατά την παραλαβή, επιθεωρήστε αμέσως τον περιέκτη και μεταφέρετε τα φιαλίδια χωρίς καθυστέρηση στην κατάλληλη αποθήκη.

Στην Cytion, υποστηρίζουμε την ποιότητα και τη βιωσιμότητα των προϊόντων μας. Εγγυόμαστε ότι τα κύτταρά μας θα είναι βιώσιμα κατά την έναρξη της καλλιέργειας για 60 ημέρες μετά την αποστολή από τις εγκαταστάσεις μας. Διαβεβαιώνουμε ότι όλα τα υλικά συμμορφώνονται με τις προδιαγραφές που περιγράφονται στο Πιστοποιητικό Ανάλυσης ή/και στο Φύλλο Προϊόντος

Για πλήρεις λεπτομέρειες, ανατρέξτε στην <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang="""x-default"">Δήλωση εγγύησης