Μετάβαση στο περιεχόμενο
U-2 OS-CRISPR-NUP96-SNAP
Ιστός
Οστά
Ασθένεια
Οστεοσάρκωμα

Έγγραφα

U-2 OS-CRISPR-NUP96-SNAP

Cell line · Αριθμός προϊόντος 300444

Η U-2 OS-CRISPR-NUP96-SNAP είναι μια γενετικά τροποποιημένη κυτταρική σειρά οστεοσαρκώματος που προέρχεται από τη μητρική ανθρώπινη κυτταρική σειρά U-2 OS. Αυτή η κυτταρική σειρά έχει υποστεί γενετική...

€800.00χωρίς ΦΠΑ και έξοδα αποστολής
Σε απόθεμα
Lot
Συνιστάται (η πιο φρέσκια παρτίδα)
  • CoA
1

01Γενικές πληροφορίες

Περιγραφή

Η U-2 OS-CRISPR-NUP96-SNAP είναι μια γενετικά τροποποιημένη κυτταρική σειρά οστεοσαρκώματος που προέρχεται από τη μητρική ανθρώπινη κυτταρική σειρά U-2 OS. Αυτή η κυτταρική σειρά έχει τροποποιηθεί μέσω επεξεργασίας γονιδιώματος με τη μεσολάβηση CRISPR/Cas9 ώστε να ενσωματώνει μια ετικέτα SNAP στο γονίδιο NUP96, επιτρέποντας την οπτικοποίηση και τη μελέτη της δυναμικής του συμπλόκου των πυρηνικών πόρων. Τα σύμπλοκα πυρηνικών πόρων (NPC) είναι ζωτικής σημασίας για τη ρύθμιση της νουκλεοκυτταροπλασματικής μεταφοράς και το NUP96 είναι σημαντικό συστατικό του NPC, διαδραματίζοντας καθοριστικό ρόλο στη δομική ακεραιότητα και λειτουργία του.

Στον κλώνο U-2 OS-CRISPR-NUP96-SNAP αριθ. 33, η ενσωμάτωση της ετικέτας SNAP στον τόπο NUP96 επιτρέπει την ειδική και ομοιοπολική προσκόλληση φθορίζοντος υποστρώματος ή άλλων χημικών ανιχνευτών που μπορούν να χρησιμοποιηθούν για απεικόνιση ζωντανών κυττάρων και άλλες βιοχημικές αναλύσεις. Αυτό το χαρακτηριστικό το καθιστά ανεκτίμητο εργαλείο για τη διερεύνηση της μοριακής δυναμικής της νουκλεοκυτταροπλασματικής μεταφοράς, την κατανόηση των παθολογιών που σχετίζονται με το NPC και τον έλεγχο για θεραπευτικές ενώσεις που επηρεάζουν τη λειτουργία του NPC. Η κυτταρική σειρά διατηρεί επίσης τα χαρακτηριστικά της γονικής σειράς U-2 OS, τα οποία περιλαμβάνουν υψηλό επίπεδο γενετικής σταθερότητας και ευκολία καλλιέργειας, καθιστώντας την κατάλληλη για διαλογή υψηλής απόδοσης και εκτεταμένες μελέτες στην κυτταρική βιολογία.

Λόγω της εξειδίκευσης της τροποποίησης στο γονίδιο NUP96, ο κλώνος U-2 OS-CRISPR-NUP96-SNAP αριθ. 33 παρέχει ένα μοναδικό μοντέλο για τη λεπτομερή μελέτη των συστατικών του NPC στο πλαίσιο της κυτταρικής λειτουργίας και δυσλειτουργίας. Οι ερευνητές μπορούν να αξιοποιήσουν το σύστημα ετικέτας SNAP για την επιλεκτική και ταχεία επισήμανση του NUP96, διευκολύνοντας την οπτικοποίηση της δυναμικής του NPC σε πραγματικό χρόνο υπό φυσιολογικές και παθολογικές συνθήκες. Ο συγκεκριμένος κλώνος μπορεί να χρησιμεύσει ως μια ισχυρή πλατφόρμα τόσο για βασική έρευνα όσο και για εφαρμοσμένες βιοϊατρικές μελέτες, συμβάλλοντας σημαντικά στους τομείς της κυτταρικής βιολογίας, της γενετικής και της ογκολογίας.

Ιστός
Οστά
Ασθένεια
Οστεοσάρκωμα

02Ταξινόμηση

Οργανισμός
Άνθρωπος
Σεξ
Γυναίκα
Ιδιότητες ανάπτυξης
Πιστός
Κατάσταση όσον αφορά τους ΓΤΟ
GMO-S1
Λεπτομέρειες σχετικά με την κατάσταση των ΓΤΟ
GMO-S1: This human osteosarcoma cell line (U2OS-CRISPR-NUP96-SNAP, clone 33) contains a CRISPR-engineered NUP96-SNAP fusion facilitating SNAP-tag chemical labeling of nuclear pores. The modification is stably integrated. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Επίπεδο βιοασφάλειας
1

03Αναγνωριστικά

Παραπομπή
U-2 OS-CRISPR-NUP96-SNAP (αριθμός καταλόγου Cytion 300444)
Αριθμός φορολογικού μητρώου NCBI
9606
Κελλοσαύρος
CVCL_B7FL
Καταθέτης
Εργαστήριο Ellenberg (EMBL)

04Έκφραση και ευαισθησία

Έκφραση πρωτεϊνών
NUP96-SNAP (πρωτεΐνη 96 του συμπλέγματος πυρηνικού πόρου, με ετικέτα SNAP)

05Χειρισμός και καλλιέργεια

Θρεπτικό μέσο
McCoys 5a, w: 3,0 g/L γλυκόζη, w: σταθερή γλουταμίνη, w: 2,0 mM πυρουβικό νάτριο, w: 2,2 g/L NaHCO3 (αριθμός άρθρου Cytion 820200a)
Ατμόσφαιρα επώασης

37°C, 5%CO2, υγροποιημένη ατμόσφαιρα.

Συμπληρώματα
Συμπληρώστε το μέσο με 10% FBS, 3,0 g/L γλυκόζη, σταθερή γλουταμίνη, 2,0 mM πυρουβικό νάτριο, 2,2 g/L NaHCO3, 1% NEAA
Αντιδραστήριο αποσύνδεσης
Accutase
Αναπαραγωγή σε υποκαλλιέργεια
Αφαιρέστε το παλιό μέσο από τα προσκολλημένα κύτταρα και πλύντε τα με PBS που δεν περιέχει ασβέστιο και μαγνήσιο. Για φιάλες T25, χρησιμοποιήστε 3-5 ml PBS και για φιάλες T75, χρησιμοποιήστε 5-10 ml. Στη συνέχεια, καλύψτε πλήρως τα κύτταρα με Accutase, χρησιμοποιώντας 1-2 ml για φιάλες T25 και 2,5 ml για φιάλες T75. Αφήστε τα κύτταρα να επωαστούν σε θερμοκρασία δωματίου για 8-10 λεπτά για να αποκολληθούν. Μετά την επώαση, αναμείξτε απαλά τα κύτταρα με 10 ml μέσου για να ανασυσταθούν και, στη συνέχεια, φυγοκεντρίστε στα 300xg για 3 λεπτά. Απορρίψτε το υπερκείμενο υγρό, ανασυστάστε τα κύτταρα σε φρέσκο μέσο και μεταφέρετέ τα σε νέες φιάλες που περιέχουν ήδη φρέσκο μέσο.
Πυκνότητα σποράς
1 x 104 κύτταρα/cm2
Ανανέωση υγρών
2 έως 3 φορές την εβδομάδα
Απόψυξη και καλλιέργεια
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

06Έλεγχος ποιότητας και κρυοσυντήρηση

Στειρότητα

Η μόλυνση από μυκόπλασμα αποκλείεται με τη χρήση τόσο των δοκιμασιών που βασίζονται στην PCR όσο και των μεθόδων ανίχνευσης μυκοπλάσματος με βάση τη φωταύγεια.

Για να διασφαλιστεί ότι δεν υπάρχει μόλυνση από βακτήρια, μύκητες ή ζύμες, οι κυτταροκαλλιέργειες υποβάλλονται σε καθημερινές οπτικές επιθεωρήσεις.

Μέσο κατάψυξης
Ως μέσο κρυοσυντήρησης, χρησιμοποιούμε πλήρες μέσο ανάπτυξης (συμπεριλαμβανομένου του FBS) + 10% DMSO για επαρκή βιωσιμότητα μετά την απόψυξη, ή CM-1 (αριθμός καταλόγου Cytion 800100), το οποίο περιλαμβάνει βελτιστοποιημένα ωσμοπροστατευτικά και μεταβολικούς σταθεροποιητές για την ενίσχυση της ανάκαμψης και τη μείωση του στρες που προκαλείται από την κρυοσυντήρηση.
Συνθήκες αποθήκευσης

Για μακροχρόνια συντήρηση, τοποθετήστε τα φιαλίδια σε υγρό άζωτο σε φάση ατμών σε θερμοκρασία περίπου -150 έως -196 °C. Η αποθήκευση στους -80 °C είναι αποδεκτή μόνο ως σύντομο ενδιάμεσο βήμα πριν από τη μεταφορά σε υγρό άζωτο.

Όροι αποστολής

Οι κρυοσυντηρημένες κυτταρικές σειρές αποστέλλονται σε ξηρό πάγο σε επικυρωμένη, μονωμένη συσκευασία με επαρκές ψυκτικό μέσο για τη διατήρηση περίπου των -78 °C καθ' όλη τη διάρκεια της μεταφοράς. Κατά την παραλαβή, επιθεωρήστε αμέσως τον περιέκτη και μεταφέρετε τα φιαλίδια χωρίς καθυστέρηση στην κατάλληλη αποθήκη.

07Δωρητής

Ηλικία δωρητή
15 χρόνια
Εθνικότητα
Καυκάσιος