U-2 OS-CRISPR-NUP96-SNAP

La U-2 OS-CRISPR-NUP96-SNAP es una línea celular de osteosarcoma modificada genéticamente derivada de la línea celular humana parental U-2 OS. Esta línea celular ha sido modificada mediante la edición genómica mediada por CRISPR/Cas9 para incorporar una etiqueta SNAP en el gen NUP96, lo que permite visualizar y estudiar la dinámica de los complejos de poros nucleares. Los complejos de poros nucleares (NPC) son cruciales para la regulación del transporte nucleocitoplasmático, y NUP96 es un componente significativo del NPC, que desempeña un papel fundamental en su integridad estructural y su función.

En el clon n.º 33 de U-2 OS-CRISPR-NUP96-SNAP, la integración de la etiqueta SNAP en el locus de NUP96 permite la unión específica y covalente de sustratos fluorescentes u otras sondas químicas que pueden utilizarse para la obtención de imágenes de células vivas y otros ensayos bioquímicos. Esta característica la convierte en una herramienta invaluable para investigar la dinámica molecular del transporte nucleocitoplasmático, comprender las patologías relacionadas con el NPC y realizar cribados de compuestos terapéuticos que afecten la función del NPC. La línea celular también conserva las características de la línea parental U-2 OS, lo que incluye un alto nivel de estabilidad genética y facilidad de cultivo, lo que la hace adecuada para el cribado de alto rendimiento y estudios exhaustivos en biología celular.

Debido a la especificidad de la modificación en el gen NUP96, el clon n.º 33 de U-2 OS-CRISPR-NUP96-SNAP ofrece un modelo único para el estudio detallado de los componentes del NPC en el contexto de la función y la disfunción celular. Los investigadores pueden aprovechar el sistema de etiquetas SNAP para marcar de manera selectiva y rápida la proteína NUP96, lo que facilita la visualización en tiempo real de la dinámica del NPC en condiciones fisiológicas y patológicas. Este clon específico puede servir como una plataforma sólida tanto para la investigación básica como para los estudios biomédicos aplicados, contribuyendo de manera significativa a los campos de la biología celular, la genética y la oncología.

37 °C, 5 % de CO₂, atmósfera humidificada.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Se descarta la contaminación por micoplasmas mediante ensayos basados en PCR y métodos de detección de micoplasmas basados en luminiscencia.

Para garantizar que no haya contaminación bacteriana, fúngica o por levaduras, los cultivos celulares se someten a inspecciones visuales diarias.

Para la conservación a largo plazo, coloque los viales en nitrógeno líquido en fase de vapor a una temperatura de entre −150 y −196 °C, aproximadamente. El almacenamiento a −80 °C solo es aceptable como un paso intermedio breve antes de transferirlos al nitrógeno líquido.

Las líneas celulares criopreservadas se envían en hielo seco, en un embalaje aislante validado que contiene suficiente refrigerante para mantener una temperatura de aproximadamente −78 °C durante todo el transporte. Al recibir el envío, revise el contenedor de inmediato y traslade los viales sin demora al lugar de almacenamiento adecuado.

En Cytion, respaldamos la calidad y la viabilidad de nuestros productos. Garantizamos que nuestras células serán viables al inicio del cultivo durante 60 días a partir de la fecha de envío desde nuestras instalaciones. Aseguramos que todos los materiales cumplen con las especificaciones descritas en el Certificado de Análisis y/o la Ficha del Producto.

Para obtener más detalles, consulte nuestra Declaración de garantía.