U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1

U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1 es una línea celular de osteosarcoma humano editada genómicamente, derivada de células U2OS, en la que el gen endógeno SEH1L (SEH1) ha sido modificado mediante la tecnología CRISPR/Cas9 para codificar una etiqueta SNAPf en marco de lectura. SEH1 es un componente del complejo Y (también conocido como complejo NUP107-160), un módulo estructural central del complejo de poros nucleares (NPC) que contribuye al ensamblaje y la estabilidad del andamio de los poros. Al insertar la secuencia codificante de SNAPf en el locus endógeno, la proteína SEH1 marcada se expresa bajo control regulatorio nativo, lo que preserva los niveles de expresión fisiológicos y minimiza las perturbaciones en la composición de los poros nucleares.

La etiqueta SNAPf es una variante modificada y de reacción rápida de la etiqueta SNAP que se une covalentemente a sustratos conjugados con bencilguanina, lo que permite un marcaje fluorescente selectivo y estable en células vivas o fijadas. En las células U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1, la proteína de fusión se localiza en la envoltura nuclear con un patrón punteado característico de la distribución de los poros nucleares (NPC). Dado que el marcaje se produce a niveles de proteína endógena, este sistema es ideal para la microscopía de fluorescencia cuantitativa, la obtención de imágenes de superresolución y los análisis de seguimiento de partículas individuales destinados a desentrañar la organización y la estequiometría de los NPC. La morfología plana y los núcleos grandes de las células U2OS facilitan aún más la visualización de alta resolución de las estructuras de la envoltura nuclear.

SEH1 participa en la biogénesis de los NPC y también se ha relacionado con procesos asociados al cinetocoro durante la mitosis. En consecuencia, esta línea celular ofrece una plataforma sólida para investigar el ensamblaje y desensamblaje de los NPC dependientes del ciclo celular, la organización espacial del complejo Y dentro del andamio de los poros y las posibles funciones duales de SEH1 en la envoltura nuclear y los cinetocoros mitóticos. U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1 permite realizar estudios mecanísticos de la arquitectura y la dinámica de los poros nucleares en condiciones de expresión fisiológicamente relevantes.

37 °C, 5 % de CO₂, atmósfera humidificada.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Se descarta la contaminación por micoplasmas mediante ensayos basados en PCR y métodos de detección de micoplasmas basados en luminiscencia.

Para garantizar que no haya contaminación bacteriana, fúngica o por levaduras, los cultivos celulares se someten a inspecciones visuales diarias.

Para la conservación a largo plazo, coloque los viales en nitrógeno líquido en fase de vapor a una temperatura de entre −150 y −196 °C, aproximadamente. El almacenamiento a −80 °C solo es aceptable como un paso intermedio breve antes de transferirlos al nitrógeno líquido.

Las líneas celulares criopreservadas se envían en hielo seco, en un embalaje aislante validado que contiene suficiente refrigerante para mantener una temperatura de aproximadamente −78 °C durante todo el transporte. Al recibir el envío, revise el contenedor de inmediato y traslade los viales sin demora al lugar de almacenamiento adecuado.

En Cytion, respaldamos la calidad y la viabilidad de nuestros productos. Garantizamos que nuestras células serán viables al inicio del cultivo durante 60 días a partir de la fecha de envío desde nuestras instalaciones. Aseguramos que todos los materiales cumplen con las especificaciones descritas en el Certificado de Análisis y/o la Ficha del Producto.

Para obtener más detalles, consulte nuestra Declaración de garantía.