U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1

U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1 je génovo upravená ľudská osteosarkómová bunka odvodená z buniek U2OS, v ktorej bol endogénny gén SEH1L (SEH1) modifikovaný pomocou technológie CRISPR/Cas9 tak, aby kódoval in-frame SNAPf tag. SEH1 je súčasťou komplexu Y (známeho aj ako komplex NUP107-160), základného štrukturálneho modulu komplexu jadrových pórov (NPC), ktorý prispieva k zostaveniu a stabilite pórového lešenia. Vložením kódujúcej sekvencie SNAPf do endogénneho lokusu sa označený proteín SEH1 exprimuje pod pôvodnou regulačnou kontrolou, čím sa zachovávajú fyziologické hladiny expresie a minimalizujú sa narušenia zloženia jadrových pórov.

Značka SNAPf je umelo vytvorená, rýchlo reagujúca varianta značky SNAP, ktorá kovalentne viaže substráty konjugované s benzylguanínom, čo umožňuje selektívne a stabilné fluorescenčné značenie v živých alebo fixovaných bunkách. V bunkách U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1 sa fúzny proteín lokalizuje do jadrovej membrány v bodkovitom vzore charakteristickom pre distribúciu NPC. Keďže značenie prebieha na úrovni endogénnych proteínov, tento systém je vhodný na kvantitatívnu fluorescenčnú mikroskopiu, zobrazovanie s vysokým rozlíšením a analýzy sledovania jednotlivých častíc zamerané na rozbor organizácie a stechiometrie NPC. Plochá morfológia a veľké jadrá buniek U2OS ďalej uľahčujú vizualizáciu štruktúr jadrovej membrány s vysokým rozlíšením.

SEH1 sa podieľa na biogenéze NPC a je tiež zapojený do procesov spojených s kinetochórom počas mitózy. Táto bunková línia preto poskytuje robustnú platformu na skúmanie zostavovania a rozkladania NPC závislého od bunkového cyklu, priestorovej organizácie Y-komplexu v rámci pórovitej kostry a potenciálnej dvojitej úlohy SEH1 v jadrovej membráne a mitotických kinetochóroch. U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1 umožňuje mechanistické štúdie architektúry a dynamiky jadrových pórov za fyziologicky relevantných podmienok expresie.

37 °C, 5 %_CO2, zvlhčená atmosféra.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Kontaminácia mykoplazmami sa vylučuje pomocou testov založených na PCR a metód detekcie mykoplaziem založených na luminiscencii.

Aby sa zabezpečilo, že nedošlo ku kontaminácii baktériami, hubami alebo kvasinkami, bunkové kultúry sa denne vizuálne kontrolujú.

Na dlhodobé uchovávanie umiestnite injekčné liekovky do kvapalnej fázy dusíka v pare pri teplote približne -150 až -196 °C. Skladovanie pri teplote -80 °C je prijateľné len ako krátky prechodný krok pred presunom do tekutého dusíka.

Kryokonzervované bunkové línie sa prepravujú na suchom ľade v overených, izolovaných obaloch s dostatočným množstvom chladiva na udržanie teploty približne -78 °C počas celej prepravy. Po prijatí ihneď skontrolujte obal a bezodkladne premiestnite injekčné liekovky do vhodného skladu.

V spoločnosti Cytion si stojíme za kvalitou a životaschopnosťou našich produktov. Garantujeme, že naše bunky budú životaschopné na začiatku kultivácie počas 60 dní po odoslaní z našich zariadení. Zaručujeme, že všetky materiály zodpovedajú špecifikáciám opísaným v certifikáte analýzy a/alebo v produktovom liste

Úplné informácie nájdete v našom <a href=""/Kto sme/záruka/"" hreflang=""x-default"">Vyhlásení o záruke