Prejsť na obsah
Bunky U2OS-CRISPR-NUP96-mEGFP
Tkanivo
Kosti
Choroba
Osteosarkóm

Dokumenty

Bunky U2OS-CRISPR-NUP96-mEGFP

Cell line · Číslo výrobku 300174

U-2 OS-CRISPR-NUP96-mEGFP je geneticky modifikovaná bunková línia odvodená od materskej línie U-2 OS ľudského osteosarkómu. Táto bunková línia obsahuje ta...

€800.00bez DPH a poštovného
Na sklade
Lot
Odporúčané (najčerstvejšia várka)
  • CoA
1

01Všeobecné informácie

Popis

U-2 OS-CRISPR-NUP96-mEGFP je geneticky modifikovaná bunková línia odvodená od materskej línie ľudského osteosarkómu U-2 OS. Táto bunková línia obsahuje cielenú inzerciu monomérneho zosilneného zeleného fluorescenčného proteínu (mEGFP) do lokusu génu NUP96, ktorá sa dosiahla pomocou technológie úpravy génov CRISPR-Cas9. NUP96, súčasť komplexu jadrových pórov, je nevyhnutný pre jadrový transport a jeho fúzia s mEGFP umožňuje vizualizáciu dynamiky jadrových pórov v reálnom čase pod fluorescenčným mikroskopom, čo poskytuje cenné poznatky o mechanizmoch jadrového transportu a nukleocytoplazmatickej dopravy.

Tento špecifický klon s číslom 195 bol vybraný pre stabilnú expresiu fúzneho proteínu NUP96-mEGFP a zachováva si typické vlastnosti línie U-2 OS vrátane robustnej cytoskeletálnej štruktúry, ktorá je rozhodujúca pri štúdiách týkajúcich sa migrácie a metastázovania rakovinových buniek. Použitie technológie CRISPR zabezpečuje presnú úpravu génov, čím sa minimalizujú necieľové účinky, ktoré by mohli ohroziť integritu experimentálnych výsledkov. Vďaka tomu je klon U-2 OS-CRISPR-NUP96-mEGFP č. 195 obzvlášť užitočný na zobrazovacie techniky s vysokým rozlíšením a podrobné štúdie bunkovej architektúry, čo napomáha pokročilému výskumu v oblasti bunkovej biológie, výskumu rakoviny a javov jadrového transportu.

Tkanivo
Kosti
Choroba
Osteosarkóm

02Klasifikácia

Organizmus
Človek
Sex
Žena
Rastové vlastnosti
Prívrženec
Stav GMO
GMO-S1
Podrobnosti o štatúte GMO
GMO-S1: This human osteosarcoma cell line (U2OS-CRISPR-NUP96-mEGFP, clone 195) contains a CRISPR-engineered NUP96-mEGFP fusion introduced via lentiviral delivery, enabling fluorescent tracking of nuclear pore complexes. The modification is stably integrated. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Úroveň biologickej bezpečnosti
1

03Charakteristiky

Morfológia
Epitelu podobné

04Identifikátory

Citácia
U-2 OS-CRISPR-NUP96-mEGFP klon č. 195 (číslo katalógu Cytion 300174)
Daňové identifikačné číslo NCBI
9606
Cellosaurus
CVCL_B7FJ
Vkladateľ
Ellenbergova laboratória (EMBL)

05Prejav a náchylnosť

Expresia proteínov
MEGFP (proteín jadrového pórového komplexu 96, označený mEGFP)

06Manipulácia a kultivácia

Kultivačné médium
McCoys 5a, w: 3,0 g/l glukóza, w: stabilný glutamín, w: 2,0 mM pyruvát sodný, w: 2,2 g/l NaHCO3 (číslo článku Cytion 820200a)
Inkubačná atmosféra

37 °C, 5 %CO2, zvlhčená atmosféra.

Doplnky stravy
Doplňte médium o 10% FBS, 1% NEAA
Disociačné činidlo
Accutase
Rozmnožovanie kultúr
Odstráňte staré médium z adherovaných buniek a premyte ich PBS, ktorý neobsahuje vápnik a horčík. Pre banky T25 použite 3 - 5 ml PBS a pre banky T75 použite 5 - 10 ml. Potom bunky úplne pokryte Accutase, pričom použite 1 - 2 ml pre banky T25 a 2,5 ml pre banky T75. Nechajte bunky inkubovať pri izbovej teplote 8-10 minút, aby sa oddelili. Po inkubácii jemne premiešajte bunky s 10 ml média, aby boli znovu suspendované, a potom ich 3 minúty odstreďujte pri 300xg. Supernatant zlikvidujte, bunky znovu rozmiešajte v čerstvom médiu a preneste ich do nových fliaš, ktoré už obsahujú čerstvé médium.
Hustota výsevu
2 až 3 x 104 buniek/cm2
Obnova kvapaliny
2 až 3-krát týždenne
Rozmrazovanie a kultivácia
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kontrola kvality a kryokonzervácia

Sterilita

Kontaminácia mykoplazmami sa vylučuje pomocou testov založených na PCR a metód detekcie mykoplaziem založených na luminiscencii.

Aby sa zabezpečilo, že nedošlo ku kontaminácii baktériami, hubami alebo kvasinkami, bunkové kultúry sa denne vizuálne kontrolujú.

Mrazové médium
Ako kryokonzervačné médium používame kompletné rastové médium (vrátane FBS) + 10 % DMSO na zabezpečenie primeranej životaschopnosti po rozmrazení alebo CM-1 (katalógové číslo 800100 spoločnosti Cytion), ktoré obsahuje optimalizované osmoprotektanty a metabolické stabilizátory na zlepšenie obnovy a zníženie stresu spôsobeného kryo.
Podmienky skladovania

Na dlhodobé uchovávanie umiestnite injekčné liekovky do kvapalnej fázy dusíka v pare pri teplote približne -150 až -196 °C. Skladovanie pri teplote -80 °C je prijateľné len ako krátky prechodný krok pred presunom do tekutého dusíka.

Dopravné podmienky

Kryokonzervované bunkové línie sa prepravujú na suchom ľade v overených, izolovaných obaloch s dostatočným množstvom chladiva na udržanie teploty približne -78 °C počas celej prepravy. Po prijatí ihneď skontrolujte obal a bezodkladne premiestnite injekčné liekovky do vhodného skladu.

08Darca

Vek darcu
15 rokov
Etnická príslušnosť
Kaukazský