U2OS-CRISPR-NUP96-mEGFP 细胞
Cell line · Product number 300174
The U-2 OS-CRISPR-NUP96-mEGFP is a genetically modified cell line derived from the human osteosarcoma U-2 OS parent line. This cell line incorporates a ta...
Recommended (freshest lot)
01General information
- Description
U-2 OS-CRISPR-NUP96-mEGFP 是一种转基因细胞系，来源于人类骨肉瘤 U-2 OS 母系。该细胞系通过 CRISPR-Cas9 基因编辑技术，在 NUP96 基因座上定向插入了单体增强型绿色荧光蛋白（mEGFP）标签。NUP96 是核孔复合体的一部分，对核转运至关重要，它与 mEGFP 的融合可以在荧光显微镜下实时观察核孔动态，为了解核转运机制和核细胞质转运提供宝贵的信息。
这个编号为 195 的特定克隆因其稳定表达 NUP96-mEGFP 融合蛋白而被选中，并保持了 U-2 OS 系的典型特征，包括在癌细胞迁移和转移相关研究中至关重要的强健细胞骨架结构。CRISPR 技术的应用确保了基因编辑的精确性，最大程度地减少了可能影响实验结果完整性的脱靶效应。这使得 U-2 OS-CRISPR-NUP96-mEGFP 195 号克隆特别适用于高分辨率成像技术和详细的细胞结构研究，有助于细胞生物学、癌症研究和核运输现象的高级研究。
- Tissue
- 骨质
- Disease
- 骨肉瘤
02Classification
- Organism
- Human
- Sex
- Female
- Growth properties
- Adherent
- GMO status
- GMO-S1
- GMO status details
- GMO-S1: This human osteosarcoma cell line (U2OS-CRISPR-NUP96-mEGFP, clone 195) contains a CRISPR-engineered NUP96-mEGFP fusion introduced via lentiviral delivery, enabling fluorescent tracking of nuclear pore complexes. The modification is stably integrated. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
- Biosafety level
- 1
03Characteristics
- Morphology
- 上皮样
04Identifiers
- Citation
- U-2 OS-CRISPR-NUP96-mEGFP克隆编号195（赛通产品编号300174）
- NCBI TaxID
- 9606
- Cellosaurus
- CVCL_B7FJ
- Depositor
- 艾伦伯格实验室（EMBL）
05Expression and susceptibility
- Protein expression
- MEGFP（核孔复合体蛋白 96，mEGFP 标记）
06Handling and culture
- Culture medium
- McCoys 5a，w：3.0 克/升葡萄糖，w：稳定谷氨酰胺，w：2.0 毫摩尔丙酮酸钠，w：2.2 克/升 NaHCO3（Cytion 文章编号 820200a）。
- Incubation atmosphere
37°C, 5%CO2, 加湿环境。
- Supplements
- 在培养基中添加 10% FBS 和 1% NEAA
- Dissociation reagent
- Accutase
- Subculturing
- 去除粘附细胞上的旧培养基，用不含钙和镁的 PBS 冲洗。T25 烧瓶用 3-5 毫升 PBS，T75 烧瓶用 5-10 毫升。然后用 Accutase 完全覆盖细胞，T25 烧瓶用 1-2 毫升，T75 烧瓶用 2.5 毫升。让细胞在室温下孵育 8-10 分钟，使其分离。孵育后，用 10 毫升培养基轻轻混合细胞使其重悬，然后用 300xg 离心 3 分钟。弃去上清液，用新鲜培养基重悬细胞，并将其转移到已装有新鲜培养基的新烧瓶中。
- Seeding density
- 2至3×10⁴个细胞/平方厘米
- Fluid renewal
- 每周 2 至 3 次
- Thawing and culturing
Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.
Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.
For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.
Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.
Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.
Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.
Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.
Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.
07Quality control and cryopreservation
- Sterility
使用基于 PCR 的检测方法和基于发光的支原体检测方法排除支原体污染。
为确保没有细菌、真菌或酵母菌污染，每天都要对细胞培养物进行目视检查。
- Freeze medium
- 我们使用完全生长培养基（包括 FBS）+10% DMSO 或 CM-1（Cytion 商品目录编号 800100）作为冷冻保存培养基，以获得足够的解冻后存活率，CM-1（Cytion 商品目录编号 800100）含有优化的渗透保护剂和代谢稳定剂，可提高恢复能力并减少冷冻引起的应激。
- Storage conditions
如需长期保存，可将样品瓶放入气相液氮中，温度约为 -150 至 -196 ℃。在-80 °C下保存只能作为转入液氮前的短暂过渡。
- Shipping conditions
冷冻保存的细胞系用干冰装运，并用经过验证的隔热包装和足够的制冷剂在整个运输过程中保持约 -78 °C 的温度。收到货后，应立即检查容器，并立即将小瓶转移到适当的储藏室。
08Donor
- Donor age
- 15 年
- Ethnicity
- 高加索人
09Legal and safety
- Safety precautions
- 计划将低温样品储存在液氮中以便将来解冻时，必须遵守严格的安全措施。在将冷冻样本移入或移出液氮罐时，必须穿戴适当的防护手套和防护服，并使用面罩或安全护目镜。这样做是为了降低在移出时因冷冻样品爆炸而造成伤害的风险，因为爆炸可能导致锋利的碎片飞溅。
- Warranty
在Cytion，我们保证产品的质量和活力。 我们保证，从我们的工厂发货后 60 天内，我们的细胞在开始培养时都是存活的。 我们保证所有材料均符合分析证书和/或产品说明书中描述的规格。
有关详细信息，请参阅我们的 <a href="" /Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">保修声明 。
- Third-party agreements apply
- Yes
.jpg)
.jpg)
.jpg)
.jpg)
