Pereiti prie turinio
U2OS-CRISPR-NUP96-mEGFP ląstelės
Audinys
Kaulas
Liga
Osteosarkoma

Dokumentai

U2OS-CRISPR-NUP96-mEGFP ląstelės

Cell line · Prekės numeris 300174

U-2 OS-CRISPR-NUP96-mEGFP yra genetiškai modifikuota ląstelių linija, išvesti iš žmogaus osteosarkomos U-2 OS pirminės linijos. Šioje ląstelių linijoje įterptas ta...

€800.00neįskaitant mokesčių ir pristatymo išlaidų
Yra sandėlyje
Lot
Rekomenduojama (šviežiausia partija)
  • CoA
1

01Bendra informacija

Aprašymas

U-2 OS-CRISPR-NUP96-mEGFP yra genetiškai modifikuota ląstelių linija, gauta iš žmogaus osteosarkomos U-2 OS pirminės linijos. Šioje ląstelių linijoje į NUP96 geno lokusą tikslingai įterpiama monomerinio sustiprinto žaliojo fluorescencinio baltymo (mEGFP) žyma, kuri gaunama naudojant CRISPR-Cas9 genų redagavimo technologiją. Branduolio porų kompleksui priklausantis NUP96 yra būtinas branduolio pernašai, o jo susiliejimas su mEGFP leidžia realiuoju laiku vizualizuoti branduolio porų dinamiką fluorescenciniu mikroskopu, suteikiant vertingų įžvalgų apie branduolio pernašos mechanizmus ir nukleocitoplazminį judėjimą.

Šis konkretus klonas, pažymėtas numeriu 195, buvo atrinktas dėl stabilios NUP96-mEGFP sintezės baltymo raiškos ir išlaiko tipiškas U-2 OS linijos savybes, įskaitant tvirtą citoskeleto struktūrą, kuri yra labai svarbi atliekant tyrimus, susijusius su vėžio ląstelių migracija ir metastazėmis. Taikant CRISPR technologiją užtikrinamas tikslus genų redagavimas, sumažinant netikslinius poveikius, kurie galėtų pakenkti eksperimentų rezultatų vientisumui. Todėl U-2 OS-CRISPR-NUP96-mEGFP klonas Nr. 195 yra ypač naudingas didelės skiriamosios gebos vaizdavimo metodams ir išsamiems ląstelės struktūros tyrimams, padedantiems atlikti pažangius ląstelės biologijos, vėžio tyrimų ir branduolinio transporto reiškinių tyrimus.

Audinys
Kaulas
Liga
Osteosarkoma

02Klasifikacija

Organizmas
Žmogus
Seksas
Moteris
Augimo savybės
Prisijungęs
GMO statusas
GMO-S1
Išsami informacija apie GMO statusą
GMO-S1: This human osteosarcoma cell line (U2OS-CRISPR-NUP96-mEGFP, clone 195) contains a CRISPR-engineered NUP96-mEGFP fusion introduced via lentiviral delivery, enabling fluorescent tracking of nuclear pore complexes. The modification is stably integrated. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Biologinio saugumo lygis
1

03Charakteristikos

Morfologija
Į epitelį panašus

04Identifikatoriai

Nuoroda
U-2 OS-CRISPR-NUP96-mEGFP klonas Nr. 195 (Cytion katalogo numeris 300174)
NCBI mokesčių identifikavimo kodas
9606
Cellosaurus
CVCL_B7FJ
Indėlininkas
Ellenbergo laboratorija (EMBL)

05Išraiška ir jautrumas

Baltojų baltymų ekspresija
MEGFP (branduolio porų komplekso baltymas 96, pažymėtas mEGFP)

06Laikymas ir auginimas

Maitinamoji terpė
McCoys 5a, w: 3,0 g/l gliukozės, w: stabilus glutaminas, w: 2,0 mM natrio piruvatas, w: 2,2 g/l NaHCO3 (Cytion gaminio numeris 820200a)
Inkubacijos aplinka

37 °C, 5 %CO2, drėkintoje atmosferoje.

Maisto papildai
Papildykite terpę 10 % FBS, 1 % NEAA
Disociacijos reagentas
Accutase
Subkultūrinis auginimas
Pašalinkite seną terpę nuo prilipusių ląstelių ir nuplaukite jas PBS, kuriame nėra kalcio ir magnio. T25 kolboms naudokite 3-5 ml PBS, o T75 kolboms - 5-10 ml. Tuomet visiškai užpilkite ląsteles "Accutase", naudodami 1-2 ml T25 kolboms ir 2,5 ml T75 kolboms. Leiskite ląstelėms inkubuotis kambario temperatūroje 8-10 minučių, kad jos atsiskirtų. Po inkubacijos atsargiai sumaišykite ląsteles su 10 ml terpės, kad jos vėl suspenduotų, tada 3 minutes centrifuguokite 300xg greičiu. Išmeskite supernatantą, vėl sutirpinkite ląsteles šviežioje terpėje ir perkelkite jas į naujas kolbas, kuriose jau yra šviežia terpė.
Sėjos tankis
2–3 x 104 ląstelės/cm2
Skysčių atnaujinimas
2-3 kartus per savaitę
Atšildymas ir auginimas
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kokybės kontrolė ir kriokonservavimas

Sterilumas

Mikoplazmos užterštumas atmetamas taikant PGR pagrįstus tyrimus ir liuminescencinius mikoplazmos aptikimo metodus.

Siekiant užtikrinti, kad nebūtų užteršimo bakterijomis, grybeliais ar mielėmis, ląstelių kultūros kasdien vizualiai tikrinamos.

Šaldymo terpė
Kaip kriokonservavimo terpę naudojame visišką augimo terpę (įskaitant FBS) + 10 % DMSO, kad būtų užtikrintas tinkamas gyvybingumas po atšildymo, arba CM-1 (Cytion katalogo numeris 800100), kurioje yra optimizuotų osmoprotektorių ir medžiagų apykaitos stabilizatorių, kad būtų pagerintas atsigavimas ir sumažintas kriokonservavimo sukeltas stresas.
Laikymo sąlygos

Norėdami ilgai saugoti, įdėkite buteliukus į garų fazės skystą azotą maždaug -150-196 °C temperatūroje. Laikymas -80 °C temperatūroje yra priimtinas tik kaip trumpas tarpinis etapas prieš perkeliant į skystąjį azotą.

Pristatymo sąlygos

Kriokonservuotos ląstelių linijos gabenamos ant sauso ledo patvirtintoje, izoliuotoje pakuotėje su pakankamu kiekiu šaldymo skysčio, kad pervežimo metu būtų palaikoma maždaug -78 °C temperatūra. Gavę pakuotę, nedelsdami ją apžiūrėkite ir nedelsdami perkelkite mėgintuvėlius į tinkamą saugyklą.

08Donoras

Donoro amžius
15 metų
Etninė priklausomybė
Kaukaziečių