İçeriğe atla
U2OS-CRISPR-NUP96-mEGFP Hücreleri
Doku
Kemik
Hastalık
Osteosarkom

U2OS-CRISPR-NUP96-mEGFP Hücreleri

Cell line · Ürün numarası 300174

U-2 OS-CRISPR-NUP96-mEGFP, insan osteosarkomu U-2 OS ana hücre hattından türetilmiş, genetik olarak modifiye edilmiş bir hücre hattıdır. Bu hücre hattı, bir ta...

€800.00vergi ve kargo hariç
Stokta mevcut
Lot
Önerilen (en taze parti)
  • CoA
1

01Genel bilgiler

Açıklama

U-2 OS-CRISPR-NUP96-mEGFP, insan osteosarkomu U-2 OS ana hattından türetilen genetik olarak değiştirilmiş bir hücre hattıdır. Bu hücre hattı, CRISPR-Cas9 gen düzenleme teknolojisi ile elde edilen NUP96 gen lokusuna monomerik Geliştirilmiş Yeşil Floresan Protein (mEGFP) etiketinin hedefli bir şekilde eklenmesini içerir. Nükleer gözenek kompleksinin bir parçası olan NUP96, nükleer taşıma için gereklidir ve mEGFP ile füzyonu, floresan mikroskobu altında nükleer gözenek dinamiklerinin gerçek zamanlı olarak görselleştirilmesine olanak tanıyarak nükleer taşıma mekanizmaları ve nükleositoplazmik kaçakçılık hakkında değerli bilgiler sağlar.

Bu 195 numaralı spesifik klon, NUP96-mEGFP füzyon proteininin stabil ekspresyonu için seçilmiştir ve kanser hücresi göçü ve metastazı ile ilgili çalışmalarda kritik olan sağlam bir hücre iskeleti yapısı da dahil olmak üzere U-2 OS soyunun tipik özelliklerini korumaktadır. CRISPR teknolojisinin uygulanması, deneysel sonuçların bütünlüğünü tehlikeye atabilecek hedef dışı etkileri en aza indirerek hassas gen düzenlemesi sağlar. Bu da U-2 OS-CRISPR-NUP96-mEGFP klon no.195'i yüksek çözünürlüklü görüntüleme teknikleri ve ayrıntılı hücresel mimari çalışmaları için özellikle kullanışlı hale getirerek hücresel biyoloji, kanser araştırmaları ve nükleer taşıma olaylarında ileri araştırmalara yardımcı olmaktadır.

Doku
Kemik
Hastalık
Osteosarkom

02Sınıflandırma

Canlı
İnsan
Cinsiyet
Kadın
Büyüme özellikleri
Bağlı
GDO durumu
GMO-S1
GDO durumuna ilişkin ayrıntılar
GMO-S1: This human osteosarcoma cell line (U2OS-CRISPR-NUP96-mEGFP, clone 195) contains a CRISPR-engineered NUP96-mEGFP fusion introduced via lentiviral delivery, enabling fluorescent tracking of nuclear pore complexes. The modification is stably integrated. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Biyogüvenlik seviyesi
1

03Özellikler

Morfoloji
Epitel benzeri

04Tanımlayıcılar

Kaynak gösterimi
U-2 OS-CRISPR-NUP96-mEGFP klon no.195 (Cytion katalog numarası 300174)
NCBI Vergi Kimlik Numarası
9606
Cellosaurus
CVCL_B7FJ
Mevduat sahibi
Ellenberg Laboratuvarı (EMBL)

05İfade ve duyarlılık

Protein ekspresyonu
MEGFP (nükleer gözenek kompleksi proteini 96, mEGFP etiketli)

06İşleme ve yetiştirme

Besiyeri
McCoys 5a, w: 3.0 g/L Glukoz, w: stabil Glutamin, w: 2.0 mM Sodyum piruvat, w: 2.2 g/L NaHCO3 (Cytion makale numarası 820200a)
Kuluçka ortamı

37°C, %5CO2, nemlendirilmiş atmosfer.

Takviyeler
Ortamı %10 FBS, %1 NEAA ile takviye edin
Ayrıştırma reaktifi
Accutase
Alt kültür oluşturma
Yapışık hücrelerden eski ortamı çıkarın ve kalsiyum ve magnezyum içermeyen PBS ile yıkayın. T25 şişeleri için 3-5 ml PBS ve T75 şişeleri için 5-10 ml kullanın. Ardından, T25 flasklar için 1-2 ml ve T75 flasklar için 2,5 ml kullanarak hücreleri Accutase ile tamamen kaplayın. Hücreleri ayırmak için oda sıcaklığında 8-10 dakika inkübasyona bırakın. İnkübasyondan sonra, hücreleri yeniden süspanse etmek için 10 ml besiyeriyle hafifçe karıştırın, ardından 300xg'de 3 dakika santrifüjleyin. Süpernatantı atın, hücreleri taze besiyerinde yeniden süspanse edin ve zaten taze besiyeri içeren yeni şişelere aktarın.
Ekim yoğunluğu
2 ila 3 x 104 hücre/cm2
Sıvı değişimi
haftada 2 ila 3 kez
Çözme ve kültürleme
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kalite kontrol ve kriyoprezervasyon

Kısırlık

Mikoplazma kontaminasyonu hem PCR tabanlı tahliller hem de lüminesans tabanlı mikoplazma tespit yöntemleri kullanılarak dışlanır.

Bakteriyel, fungal veya maya kontaminasyonu olmadığından emin olmak için hücre kültürleri günlük görsel incelemelere tabi tutulur.

Dondurma ortamı
Kriyoprezervasyon ortamı olarak, yeterli çözülme sonrası canlılık için tam büyüme ortamı (FBS dahil) + %10 DMSO veya iyileşmeyi artırmak ve kriyo-indüklenmiş stresi azaltmak için optimize edilmiş ozmoprotektanlar ve metabolik stabilizatörler içeren CM-1 (Cytion katalog numarası 800100) kullanıyoruz.
Saklama koşulları

Uzun süreli muhafaza için flakonları yaklaşık -150 ila -196 °C'de buhar fazlı sıvı nitrojen içine yerleştirin. 80 °C'de saklama yalnızca sıvı nitrojene aktarılmadan önce kısa bir ara adım olarak kabul edilebilir.

Nakliye koşulları

Kriyoprezerve edilmiş hücre hatları, nakliye boyunca yaklaşık -78 °C'yi korumak için yeterli soğutucu akışkan içeren, onaylanmış, yalıtılmış ambalajlarda kuru buz üzerinde gönderilir. Teslim aldığınızda, kabı hemen inceleyin ve flakonları gecikmeden uygun depoya aktarın.

08Bağışçı

Bağışçının yaşı
15 yıl
Etnik köken
Kafkas