Skip to content
תאי U2OS-CRISPR-NUP96-mEGFP
Tissue
עצם
Disease
אוסטאוסרקומה

Documents

תאי U2OS-CRISPR-NUP96-mEGFP

Cell line · Product number 300174

The U-2 OS-CRISPR-NUP96-mEGFP is a genetically modified cell line derived from the human osteosarcoma U-2 OS parent line. This cell line incorporates a ta...

US$800.00excl. tax and shipping
In stock
Lot
Recommended (freshest lot)
  • CoA
1

01General information

Description

U-2 OS-CRISPR-NUP96-mEGFP הוא קו תאים מהונדס גנטית שמקורו בקו התאים האב U-2 OS של אוסטאוסרקומה אנושית. קו תאים זה משלב החדרה ממוקדת של התג המונומרי Enhanced Green Fluorescent Protein (mEGFP) בלוקוס הגן NUP96, באמצעות טכנולוגיית עריכת הגנים CRISPR-Cas9. NUP96, חלק ממכלול הנקבוביות הגרעיניות, חיוני לתחבורה גרעינית, והמיזוג שלו עם mEGFP מאפשר הדמיה בזמן אמת של הדינמיקה של הנקבוביות הגרעיניות תחת מיקרוסקופ פלואורסצנטי, ומספק תובנות חשובות על מנגנוני התחבורה הגרעינית והתנועה בין הגרעין לציטופלזמה.

שיבוט ספציפי זה, שמספרו 195, נבחר בשל הביטוי היציב של חלבון ההיתוך NUP96-mEGFP ושומר על המאפיינים הטיפוסיים של שושלת U-2 OS, כולל מבנה ציטוסקלטלי חזק, החיוני במחקרים הקשורים להגירה של תאי סרטן ולגרורות. השימוש בטכנולוגיית CRISPR מבטיח עריכת גנים מדויקת, וממזער תופעות לוואי שעלולות לפגוע בתוצאות הניסוי. הדבר הופך את שיבוט U-2 OS-CRISPR-NUP96-mEGFP מס' 195 לשימושי במיוחד עבור טכניקות הדמיה ברזולוציה גבוהה ומחקרים מפורטים על מבנה התא, ומסייע במחקר מתקדם בביולוגיה תאית, מחקר סרטן ותופעות הובלה גרעינית.

Tissue
עצם
Disease
אוסטאוסרקומה

02Classification

Organism
Human
Sex
Female
Growth properties
Adherent
GMO status
GMO-S1
GMO status details
GMO-S1: This human osteosarcoma cell line (U2OS-CRISPR-NUP96-mEGFP, clone 195) contains a CRISPR-engineered NUP96-mEGFP fusion introduced via lentiviral delivery, enabling fluorescent tracking of nuclear pore complexes. The modification is stably integrated. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Biosafety level
1

03Characteristics

Morphology
דמוי אפיתל

04Identifiers

Citation
U-2 OS-CRISPR-NUP96-mEGFP שיבוט מס' 195 (מספר קטלוגי Cytion 300174)
NCBI TaxID
9606
Cellosaurus
CVCL_B7FJ
Depositor
מעבדת אלנברג (EMBL)

05Expression and susceptibility

Protein expression
MEGFP (חלבון מורכב נקבוביות גרעיניות 96, מתויג mEGFP)

06Handling and culture

Culture medium
McCoys 5a, w: 3.0 g/L גלוקוז, w: יציב גלוטמין, w: 2.0 mM נתרן פירובט, w: 2.2 g/L NaHCO3 (מספר פריט Cytion 820200a)
Incubation atmosphere

37°C, 5%CO2, אווירה לחה.

Supplements
הוסף לתמיסה 10% FBS, 1% NEAA
Dissociation reagent
אקוטאז
Subculturing
הסר את המדיום הישן מהתאים הדבוקים ושטוף אותם ב-PBS ללא סידן ומגנזיום. עבור בקבוקי T25, השתמש ב-3-5 מ"ל PBS, ועבור בקבוקי T75, השתמש ב-5-10 מ"ל. לאחר מכן, כסה את התאים לחלוטין ב-Accutase, תוך שימוש ב-1-2 מ"ל עבור בקבוקי T25 ו-2.5 מ"ל עבור בקבוקי T75. השאר את התאים לדגירה בטמפרטורת החדר למשך 8-10 דקות כדי לנתק אותם. לאחר הדגירה, ערבב בעדינות את התאים עם 10 מ"ל של מדיום כדי להחזיר אותם לתמיסה, ואז סובב בצנטריפוגה ב-300xg למשך 3 דקות. השלך את הנוזל העליון, החזר את התאים לתמיסה במדיום טרי והעבר אותם לצלחות חדשות שכבר מכילות מדיום טרי.
Seeding density
2 עד 3 x 104 תאים/סמ"ר
Fluid renewal
2 עד 3 פעמים בשבוע
Thawing and culturing
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Quality control and cryopreservation

Sterility

זיהום במיקופלסמה נשלל באמצעות בדיקות מבוססות PCR ושיטות זיהוי מיקופלסמה מבוססות לומניסצנציה.

כדי להבטיח שאין זיהום חיידקי, פטרייתי או שמרי, תרבויות התאים עוברות בדיקות ויזואליות יומיות.

Freeze medium
כמדיום לשימור בקירור, אנו משתמשים במדיום גידול מלא (כולל FBS) + 10% DMSO כדי להבטיח חיוניות נאותה לאחר ההפשרה, או CM-1 (מספר קטלוגי Cytion 800100), הכולל חומרים אוסמו-מגנים ומייצבי מטבוליזם משופרים כדי לשפר את ההתאוששות ולהפחית את הלחץ הנגרם מהקפאה.
Storage conditions

לשימור לטווח ארוך, יש להניח את הבקבוקונים בחנקן נוזלי במצב של אדי בטמפרטורה של כ-150 עד 196 מעלות צלזיוס. אחסון בטמפרטורה של 80 מעלות צלזיוס מקובל רק כצעד ביניים קצר לפני העברה לחנקן נוזלי.

Shipping conditions

שורות תאים שהוקפאו נשלחות בקרח יבש באריזה מאושרת ומבודדת עם כמות מספקת של חומר קירור כדי לשמור על טמפרטורה של כ-78°C- במהלך ההובלה. עם קבלת המשלוח, יש לבדוק את המכל מיד ולהעביר את הבקבוקונים ללא דיחוי לאחסון מתאים.

08Donor

Donor age
15 שנים
Ethnicity
קווקזי