U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup358/RanBP2

U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup358/RanBP2 הוא קו תאים של אוסטאוסרקומה אנושית שעבר עריכת גנום, שמקורו בתאי U2OS, בהם לוקוס RANBP2 האנדוגני (הידוע גם כ-NUP358) שונה באמצעות CRISPR/Cas9 כדי לקודד תגית SNAPf בתוך המסגרת עם החלבון המקורי. Nup358/RanBP2 הוא נוקליופורין גדול הממוקם בסיבי הציטופלסמה של קומפלקס הנקבוביות הגרעיניות (NPC) וממלא תפקידים קריטיים בהובלה גרעינית-ציטופלסמית, SUMOylation ותהליכים מיטוטיים. תיוג אנדוגני מבטיח ש-SNAPf-Nup358 יבוא לידי ביטוי תחת בקרה פיזיולוגית של הפרומוטור, תוך שמירה על רמות הביטוי המקוריות ומזעור תופעות לוואי הקשורות למערכות ביטוי-יתר.

התג SNAPf הוא גרסה מהירה לסימון של התג SNAP, אשר נקשר באופן קוולנטי למצע המקושר לבנזילגואנין, ומאפשר סימון פלואורסצנטי סלקטיבי ויציב של Nup358 בתאים חיים או קבועים. בתאי U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup358/RanBP2, החלבון הממוזג מתמקם במעטפת הגרעין בתפוצה נקודתית האופיינית לסיבי NPC ציטופלזמטיים. תצורה זו תומכת בהדמיה פלואורסצנטית ברזולוציה גבוהה, מיקרוסקופיה ברזולוציה גבוהה, תיוג פולס-צ'ייס וגישות מעקב אחר מולקולה בודדת לחקר הארכיטקטורה והדינמיקה של NPC. המורפולוגיה השטוחה והגרעינים הגדולים של תאי U2OS מקלים עוד יותר על הדמיה כמותית של מבני מעטפת הגרעין.

מודל זה מאפשר לחקור את התפקידים הספציפיים של Nup358 בייצוא גרעיני תלוי CRM1/exportin, בוויסות מחזור Ran GTPase ובארגון המרחבי של פלטפורמות הובלה ציטופלזמטיות. בהתחשב במעורבותו של Nup358 בהרכבת ציר מיטוטי ובתפקוד קינטוכור, קו התאים מתאים גם לחקר חלוקה מחדש של נוקליופורינים ותהליך פירוק/הרכבה מחדש של NPC במהלך מיטוזה, התלויים במחזור התא. U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup358/RanBP2 מספק פלטפורמה רלוונטית מבחינה פיזיולוגית לניתוח ההיבטים המבניים והתפקודיים של הפן הציטופלזמי של קומפלקס הנקבוביות הגרעיניות בתאים אנושיים.

37°C, 5%_CO2, אווירה לחה.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

זיהום במיקופלסמה נשלל באמצעות בדיקות מבוססות PCR ושיטות זיהוי מיקופלסמה מבוססות לומניסצנציה.

כדי להבטיח שאין זיהום חיידקי, פטרייתי או שמרי, תרבויות התאים עוברות בדיקות ויזואליות יומיות.

לשימור לטווח ארוך, יש להניח את הבקבוקונים בחנקן נוזלי במצב של אדי בטמפרטורה של כ-150 עד 196 מעלות צלזיוס. אחסון בטמפרטורה של 80 מעלות צלזיוס מקובל רק כצעד ביניים קצר לפני העברה לחנקן נוזלי.

שורות תאים שהוקפאו נשלחות בקרח יבש באריזה מאושרת ומבודדת עם כמות מספקת של חומר קירור כדי לשמור על טמפרטורה של כ-78°C- במהלך ההובלה. עם קבלת המשלוח, יש לבדוק את המכל מיד ולהעביר את הבקבוקונים ללא דיחוי לאחסון מתאים.

ב-Cytion, אנו עומדים מאחורי האיכות והכדאיות של המוצרים שלנו. אנו מבטיחים שתאינו יהיו קיימים בתחילת התרבית למשך 60 יום לאחר המשלוח מהמתקנים שלנו. אנו מבטיחים שכל החומרים תואמים למפרטים המתוארים בתעודת הניתוח ו/או בדף המוצר.

לפרטים מלאים, אנא עיינו ב <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">הצהרת האחריות שלנו