U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup358/RanBP2

U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup358/RanBP2 är en genredigerad human osteosarkomcellinje som härrör från U2OS-celler, där den endogena RANBP2-lokusen (även känd som NUP358) har modifierats med CRISPR/Cas9 för att koda en SNAPf-tagg i ram med det naturliga proteinet. Nup358/RanBP2 är ett stort nukleoporin som lokaliseras till cytoplasmiska filament i kärnporekomplexet (NPC) och spelar en avgörande roll i nukleocytoplasmatisk transport, SUMOylering och mitotiska processer. Endogen märkning säkerställer att SNAPf-Nup358 uttrycks under fysiologisk promotorkontroll, vilket bibehåller naturliga expressionsnivåer och minimerar artefakter associerade med överuttryckssystem.

SNAPf-taggen är en snabbmärkningsvariant av SNAP-taggen som kovalent binder bensylguaninkonjugerade substrat, vilket möjliggör selektiv och stabil fluorescerande märkning av Nup358 i levande eller fixerade celler. I U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup358/RanBP2-celler lokaliseras fusionsproteinet till kärnmembranet i en punktformig distribution som är karakteristisk för cytoplasmatiska NPC-filament. Denna konfiguration stödjer högupplöst fluorescensavbildning, superupplöst mikroskopi, puls-chase-märkning och spårning av enskilda molekyler för att studera NPC-arkitektur och -dynamik. Den plana morfologin och de stora kärnorna i U2OS-celler underlättar ytterligare kvantitativ avbildning av kärnmembranstrukturer.

Denna modell möjliggör undersökning av Nup358-specifika roller i CRM1/exportinberoende kärnexport, Ran GTPas-cykelreglering och den rumsliga organisationen av cytoplasmiska transportplattformar. Med tanke på Nup358:s inblandning i mitotisk spindelmontering och kinetokorfunktion är cellinjen också lämplig för att studera cellcykelberoende omfördelning av nukleoporiner och NPC-demontering/återmontering under mitos. U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup358/RanBP2 tillhandahåller en fysiologiskt relevant plattform för att analysera strukturella och funktionella aspekter av den cytoplasmiska ytan av kärnporekomplexet i humana celler.

37°C, 5%_CO2, befuktad atmosfär.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Mykoplasmakontaminering utesluts med hjälp av både PCR-baserade analyser och luminiscensbaserade metoder för mykoplasmadiagnostik.

För att säkerställa att det inte finns någon kontaminering av bakterier, svamp eller jäst utsätts cellkulturerna för dagliga visuella inspektioner.

För långtidsförvaring, placera flaskorna i flytande kväve i ångfas vid ca -150 till -196 °C. Förvaring vid -80 °C är acceptabelt endast som ett kort mellanliggande steg innan överföring till flytande kväve.

Kryopreserverade cellinjer skickas på torris i validerade, isolerade förpackningar med tillräckligt med kylmedel för att hålla cirka -78 °C under hela transporten. Vid mottagandet ska behållaren omedelbart inspekteras och flaskorna utan dröjsmål överföras till lämplig förvaring.

På Cytion står vi bakom våra produkters kvalitet och livskraft. Vi garanterar att våra celler är livsdugliga vid odlingens början i 60 dagar efter leverans från våra anläggningar. Vi försäkrar att allt material överensstämmer med de specifikationer som beskrivs i analyscertifikatet och/eller produktbladet

För fullständig information, se vår <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Garantiförklaring