U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup358/RanBP2

U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup358/RanBP2 е геномно редактирана човешка остеосаркомна клетъчна линия, получена от U2OS клетки, в които ендогенният локус RANBP2 (известен също като NUP358) е модифициран чрез CRISPR/Cas9, за да кодира SNAPf таг в рамката на естествения протеин. Nup358/RanBP2 е голям нуклеопорин, локализиран в цитоплазмените филаменти на ядрения порен комплекс (NPC) и играе критична роля в нуклеоцитоплазмения транспорт, SUMOилирането и митотичните процеси. Ендогенното маркиране гарантира, че SNAPf-Nup358 се експресира под физиологичен промотор, поддържайки естествените нива на експресия и минимизирайки артефактите, свързани с системите за свръхекспресия.

SNAPf тагът е вариант на SNAP-тага за бързо маркиране, който ковалентно се свързва с бензилгуанин-конюгирани субстрати, позволявайки селективно и стабилно флуоресцентно маркиране на Nup358 в живи или фиксирани клетки. В клетки U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup358/RanBP2, фузионният протеин се локализира в ядрената мембрана в характерна за цитоплазмените NPC филаменти точкова разпределение. Тази конфигурация поддържа флуоресцентно изображение с висока разделителна способност, микроскопия със суперразделителна способност, маркиране с импулсно преследване и подходи за проследяване на единични молекули за изучаване на архитектурата и динамиката на NPC. Плоската морфология и големите ядра на U2OS клетките допълнително улесняват количественото изображение на структурите на ядрената мембрана.

Този модел позволява изследване на специфичните роли на Nup358 в CRM1/експортин-зависимия ядрен експорт, регулацията на цикъла на Ran GTPase и пространствената организация на цитоплазмените транспортни платформи. Предвид участието на Nup358 в сглобяването на митотичния шпиндел и функцията на кинетохора, клетъчната линия е подходяща и за изучаване на зависимата от клетъчния цикъл преразпределение на нуклеопорини и разглобяване/сглобяване на NPC по време на митоза. U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup358/RanBP2 предоставя физиологично релевантна платформа за разлагане на структурните и функционалните аспекти на цитоплазмената повърхност на ядрения порен комплекс в човешките клетки.

37°C, 5%_CO2, овлажнена атмосфера.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Замърсяването с микоплазма се изключва както чрез PCR-базирани анализи, така и чрез луминесцентни методи за откриване на микоплазма.

За да се гарантира, че няма бактериално, гъбично или дрождево замърсяване, клетъчните култури се подлагат на ежедневни визуални проверки.

За дълготрайно съхранение поставете флаконите в течен азот в парна фаза при температура около -150 до -196 °C. Съхранението при -80 °C е приемливо само като кратък междинен етап преди прехвърлянето в течен азот.

Криоконсервираните клетъчни линии се транспортират върху сух лед в утвърдени, изолирани опаковки с достатъчно хладилен агент, за да се поддържа приблизително -78 °C по време на транспортирането. При получаването незабавно прегледайте опаковката и незабавно прехвърлете флаконите за подходящо съхранение.

Ние в Cytion заставаме зад качеството и жизнеспособността на нашите продукти. Гарантираме, че нашите клетки ще бъдат жизнеспособни в началото на култивирането в продължение на 60 дни след изпращането им от нашите съоръжения. Гарантираме, че всички материали отговарят на спецификациите, описани в сертификата за анализ и/или продуктовата листа

За пълни подробности, моля, направете справка с нашата <a href=""/Кои сме ние/Гаранция/"" hreflang=""x-default"">Гаранционна декларация