U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup358/RanBP2

U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup358/RanBP2は、U2OS細胞由来のゲノム編集ヒト骨肉腫細胞株であり、内因性RANBP2（別名NUP358）遺伝子座がCRISPR/Cas9により改変され、天然タンパク質とフレームを合わせた位置にSNAPfタグをコードするようにされている。 Nup358/RanBP2は核孔複合体（NPC）の細胞質側フィラメントに局在する大型ヌクレオポリンであり、核細胞質輸送、SUMO化、有糸分裂過程において重要な役割を果たす。内因性タグ付けにより、SNAPf-Nup358は生理的プロモーター制御下で発現し、天然の発現レベルを維持するとともに、過剰発現システムに伴うアーティファクトを最小限に抑える。

SNAPfタグはSNAPタグの高速標識変異体であり、ベンジルグアニン結合基を有する基質と共有結合し、生細胞または固定細胞におけるNup358の選択的かつ安定な蛍光標識を可能にします。 U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup358/RanBP2細胞では、この融合タンパク質は細胞質NPCフィラメントに特徴的な点状分布で核膜に局在します。この構造は、NPCの構造と動態を研究するための高分解能蛍光イメージング、超解像顕微鏡、パルスチェイス標識、単一分子追跡アプローチをサポートします。 U2OS細胞の平坦な形態と大きな核は、核膜構造の定量的イメージングをさらに容易にする。

本モデル系は、Nup358がCRM1/エクスポーチン依存性核輸出、Ran GTPaseサイクル制御、細胞質輸送プラットフォームの空間的組織化において担う特異的役割の解明を可能とする。Nup358が有糸分裂紡錘体形成及び動原体機能に関与することを踏まえ、本細胞株は核孔タンパク質の細胞周期依存的再分布や有糸分裂時の核孔複合体解離・再構築の研究にも適している。 U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup358/RanBP2は、ヒト細胞における核孔複合体の細胞質側の構造的・機能的側面を解明するための生理学的に関連性の高いプラットフォームを提供する。

37℃、5%_CO2、加湿雰囲気。

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

マイコプラズマ汚染は、PCRベースのアッセイと発光ベースのマイコプラズマ検出法の両方を用いて除外される。

細菌、真菌、酵母のコンタミネーションがないことを確認するため、細胞培養物は毎日目視検査が行われる。

長期保存の場合、バイアルを-150～-196℃の気相液体窒素に入れる。80℃での保存は、液体窒素に移す前の短い暫定措置としてのみ許容される。

凍結保存された細胞株は、輸送中約-78℃を維持するのに十分な保冷剤とともに、有効な断熱包装でドライアイスとともに輸送される。受領後、直ちに容器を検査し、遅滞なくバイアルを適切な保管場所に移してください。

サイシオンは、製品の品質と生存率を保証します。 当社では、培養を開始した時点で、当社施設からの出荷後60日間、細胞が生存可能であることを保証しています。 すべての材料が、分析証明書および／または製品シートに記載された仕様に適合していることを保証します。

詳細については、<a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Warranty Statement をご参照ください。