U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup133

U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup133 เป็นสายพันธุ์เซลล์มะเร็งกระดูกชนิด osteosarcoma ของมนุษย์ที่ถูกดัดแปลงพันธุกรรมโดยมีพื้นฐานมาจากสายพันธุ์ U2OS ซึ่งบริเวณ NUP133 ในจีโนมธรรมชาติได้ถูกปรับเปลี่ยนโดยใช้เทคโนโลยี CRISPR/Cas9 เพื่อเพิ่มรหัสแท็ก SNAPf ที่ปลาย C-terminal เข้าไป NUP133 เป็นองค์ประกอบหลักของ Y-complex (NUP107-160 complex) ซึ่งเป็นซับคอมเพล็กซ์โครงสร้างที่สำคัญสำหรับการประกอบและการรักษาโครงสร้างของนิวเคลียร์พอร์คอมเพล็กซ์ (NPC) โดยการนำลำดับรหัส SNAPf เข้าไปในเฟรมที่ตำแหน่งต้นกำเนิดตามธรรมชาติ โปรตีนฟิวชั่นจะถูกแสดงออกภายใต้การควบคุมตามธรรมชาติของระบบ รักษาปริมาณการแสดงออกในระดับทางสรีรวิทยาและการกระจายตัวภายในเซลล์

แท็ก SNAPf เป็นรูปแบบที่ติดฉลากอย่างรวดเร็วของแท็ก SNAP ซึ่งเป็นเอนไซม์ O6-alkylguanine-DNA alkyltransferase ที่ถูกดัดแปลงทางพันธุกรรมซึ่งทำปฏิกิริยาแบบโควาเลนต์กับซับสเตรตที่เชื่อมต่อกับเบนซิลกัวไนน์ สิ่งนี้ช่วยให้สามารถติดฉลากด้วยสารเรืองแสงที่มีความจำเพาะสูงและหลากหลายของ Nup133 ในเซลล์ที่มีชีวิตหรือเซลล์ที่ถูกตรึง โดยใช้ซับสเตรต SNAP ที่ซึมผ่านเซลล์ได้หรือซึมผ่านเซลล์ไม่ได้ ในเซลล์ U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup133 โปรตีนฟิวชันจะสะสมอยู่ที่เยื่อหุ้มนิวเคลียสในรูปแบบจุดประ ซึ่งเป็นลักษณะเฉพาะของคอมเพล็กซ์รูพรุนนิวเคลียร์ เนื่องจากการติดแท็กเกิดขึ้นที่ตำแหน่งต้นกำเนิดในจีโนม จึงมีการรบกวนต่อสัดส่วนและโครงสร้างของ NPC เพียงเล็กน้อย ทำให้โมเดลนี้เหมาะสำหรับการศึกษาด้วยกล้องจุลทรรศน์แบบซูเปอร์เรโซลูชันเชิงปริมาณ การติดตามโมเลกุลเดี่ยว และการวิเคราะห์จลนศาสตร์ของการประกอบและการสลายตัวของ NPC

สายเซลล์นี้ให้แพลตฟอร์มที่แข็งแกร่งสำหรับการศึกษาการขนส่งนิวเคลียร์, การเคลื่อนไหวของนิวเคลียสและไซโทพลาซึม, การสร้าง NPC ในช่วงระหว่างเฟสและการประกอบใหม่ของนิวเคลียสหลังการแบ่งเซลล์, และการจัดโครงสร้างของ Y-complex ภายในโครงร่างของรู. พื้นหลังของ U2OS มีลักษณะรูปร่างแบนและนิวเคลียสขนาดใหญ่ ซึ่งเอื้อต่อการถ่ายภาพความละเอียดสูง เซลล์ U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup133 เหมาะอย่างยิ่งสำหรับการทดลองป้ายฉลากแบบพัลส์-เชส การถ่ายภาพด้วยกล้องจุลทรรศน์แสงและอิเล็กตรอนแบบสัมพันธ์กัน และวิธีการถ่ายภาพหลายสีร่วมกับนิวเคลโอโปรินหรือปัจจัยการขนส่งที่มีการติดแท็กภายในเซลล์เพิ่มเติม

37°C, 5%_CO2, บรรยากาศชื้น

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

การปนเปื้อนของไมโคพลาสมาถูกตัดออกโดยใช้ทั้งการทดสอบแบบ PCR และการตรวจหาไมโคพลาสมาโดยใช้วิธีการเรืองแสง

เพื่อให้แน่ใจว่าไม่มีการปนเปื้อนของแบคทีเรีย เชื้อรา หรือยีสต์ การเพาะเลี้ยงเซลล์จะถูกตรวจสอบด้วยสายตาทุกวัน

สำหรับการเก็บรักษาในระยะยาว ให้วางหลอดบรรจุในไนโตรเจนเหลวในสถานะไอที่อุณหภูมิประมาณ −150 ถึง −196 °C การเก็บรักษาที่อุณหภูมิ −80 °C สามารถใช้ได้เฉพาะในระยะสั้นก่อนการย้ายไปยังไนโตรเจนเหลวเท่านั้น

เซลล์ไลน์ที่แช่แข็งในไนโตรเจนเหลวจะถูกจัดส่งในบรรจุภัณฑ์ที่ผ่านการตรวจสอบแล้วและมีการเก็บรักษาความเย็นด้วยน้ำแข็งแห้ง พร้อมสารทำความเย็นที่เพียงพอเพื่อรักษาอุณหภูมิประมาณ −78 °C ตลอดการขนส่ง เมื่อได้รับสินค้า ให้ตรวจสอบภาชนะทันทีและถ่ายโอนหลอดทดลองไปยังที่เก็บที่เหมาะสมโดยไม่ล่าช้า

ที่Cytion เรามุ่งมั่นในคุณภาพและความมีชีวิตของผลิตภัณฑ์ของเรา เรารับประกันว่าเซลล์ของเราจะยังมีชีวิตอยู่เมื่อเริ่มการเพาะเลี้ยงเป็นเวลา 60 วันหลังจากจัดส่งจากโรงงานของเรา เรารับรองว่าวัสดุทั้งหมดเป็นไปตามข้อกำหนดที่ระบุไว้ใน ใบรับรองการวิเคราะห์ และ/หรือแผ่นข้อมูลผลิตภัณฑ์

สำหรับรายละเอียดเพิ่มเติม กรุณาดูที่ <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">นโยบายการรับประกัน.