U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup133

U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup133 is een genetisch gemanipuleerde menselijke osteosarcoomcellijn afgeleid van de oorspronkelijke U2OS-achtergrond, waarin de endogene NUP133-locus is gemodificeerd met behulp van CRISPR/Cas9-gemedieerde genoombewerking om een C-terminale SNAPf-tag te coderen. NUP133 is een kerncomponent van het Y-complex (NUP107-160-complex), een structureel subcomplex dat essentieel is voor de assemblage en het onderhoud van het nucleaire poriecomplex (NPC). Door de SNAPf-coderende sequentie in-frame in de endogene locus te introduceren, wordt het fusie-eiwit onder natuurlijke regulerende controle tot expressie gebracht, waardoor de fysiologische expressieniveaus en subcellulaire lokalisatie behouden blijven.

De SNAPf-tag is een snel labelende variant van de SNAP-tag, een gemanipuleerd O6-alkylguanine-DNA-alkyltransferase dat covalent reageert met benzylguanine-geconjugeerde substraten. Dit maakt een zeer specifieke en veelzijdige fluorescerende labeling van Nup133 in levende of gefixeerde cellen mogelijk met behulp van celpermeabele of impermeabele SNAP-substraten. In U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup133-cellen lokaliseert het fusie-eiwit zich in de kernmembraan in een puntvormig patroon dat kenmerkend is voor nucleaire poriecomplexen. Omdat de tagging plaatsvindt op de endogene locus, worden de stoichiometrie en architectuur van NPC minimaal verstoord, waardoor dit model geschikt is voor kwantitatieve superresolutiemicroscopie, het volgen van afzonderlijke moleculen en kinetische analyses van NPC-assemblage en -omzet.

Deze cellijn biedt een robuust platform voor het bestuderen van nucleair transport, nucleocytoplasmatische transportdynamica, NPC-biogenese tijdens interfase en postmitotische nucleaire herassemblage, en de structurele organisatie van het Y-complex binnen het poriënraamwerk. De U2OS-achtergrond biedt een vlakke morfologie en grote kernen, wat beeldvorming met hoge resolutie vergemakkelijkt. U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup133-cellen zijn bijzonder geschikt voor pulse-chase-labeling-experimenten, correlatieve licht- en elektronenmicroscopie en multicolor beeldvorming in combinatie met aanvullende endogeen gelabelde nucleoporines of transportfactoren.

37°C, 5%_CO2, bevochtigde atmosfeer.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Mycoplasmaverontreiniging wordt uitgesloten met zowel PCR-gebaseerde testen als op luminescentie gebaseerde mycoplasmadetectiemethoden.

Om er zeker van te zijn dat er geen besmetting is met bacteriën, schimmels of gisten, worden de celculturen dagelijks onderworpen aan visuele inspecties.

Voor langdurige bewaring plaatst u flesjes in vloeibare stikstof in dampfase bij ongeveer -150 tot -196 °C. Opslag bij -80 °C is alleen aanvaardbaar als korte tussenstap vóór overbrenging naar vloeibare stikstof.

Gecryopreserveerde cellijnen worden verzonden op droog ijs in gevalideerde, geïsoleerde verpakkingen met voldoende koelmiddel om gedurende het transport ongeveer -78 °C te handhaven. Inspecteer de verpakking onmiddellijk na ontvangst en breng de flacons onverwijld over naar de juiste opslagplaats.

Bij Cytion staan we achter de kwaliteit en levensvatbaarheid van onze producten. We garanderen dat onze cellen levensvatbaar zijn bij het begin van de kweek gedurende 60 dagen na verzending vanuit onze faciliteiten. We verzekeren dat alle materialen voldoen aan de specificaties beschreven in het analysecertificaat en/of productblad

Raadpleeg voor volledige informatie onze <a href=""/Wie-zijn-wij/Garantie/"" hreflang=""x-default"">Garantieverklaring