U2OS-CRISPR-TPR-SNAP

U2OS-CRISPR-TPR-SNAP on genomin muokattu ihmisen osteosarkoomasolulinja, joka on peräisin U2OS-soluista, joissa endogeeninen TPR-geeni (Translocated Promoter Region) on muokattu CRISPR/Cas9-tekniikalla koodaamaan in-frame SNAP-tunniste. TPR on suuri kierteinen nukleoporiini, joka lokalisoituu ydinporikompleksin (NPC) nukleoplasmisen puolen ydinkoriin. Merkitsemällä TPR:n sen endogeeniseen lokukseen fuusioproteiini ilmaistaan natiivin säätelyn alaisena, säilyttäen fysiologiset ilmentymistasot ja ylläpitäen asianmukaista sisällyttämistä ydinkorirakenteeseen.

SNAP-tag mahdollistaa TPR:n kovalenttisen leimauksen bentsyyliguaninikonjugoitujen fluoresoivien substraattien avulla elävissä tai kiinnitetyissä soluissa, mikä mahdollistaa erittäin spesifisen ja vakaan visualisoinnin. U2OS-CRISPR-TPR-SNAP-soluissa leimattu TPR näyttää tyypillisen pisteellisen rengasmaisen jakautumisen ydinvaipassa, mikä vastaa NPC:hen liittyviä ydinkorin rakenteita. Tämä järjestelmä sopii hyvin kvantitatiiviseen fluoresenssimikroskopiaan, superresoluutioiseen kuvantamiseen, pulssin jäljitysleimaukseen ja ydinkorin kokoonpanon ja kierron dynaamisiin tutkimuksiin. U2OS-solujen tasainen morfologia ja suuret ytimet helpottavat ydinvaipaan liittyvien rakenteiden korkean resoluution kuvantamista.

TPR:llä on tärkeä rooli mRNA:n viennissä, ydinkuljetuksen säätelyssä, kromatiinin organisoinnissa ytimen reuna-alueella ja genomin spatiaalisessa organisoinnissa. TPR on myös mukana ydinkuljetukseen liittyvien aliosastojen muodostumisessa ja heterokromatiinin poissulkemisessa ydinporoihin liittyvistä alueista. U2OS-CRISPR-TPR-SNAP tarjoaa fysiologisesti merkityksellisen mallin ydinkorin rakenteen ja dynamiikan analysoimiseksi, nukleosytoplasmisen kuljetusmekanismien tutkimiseksi ja ydinkoteloon liittyvien kromatiinin vuorovaikutusten tutkimiseksi endogeenisissä ilmentymisolosuhteissa.

37 °C, 5 %_CO2, kostutettu ilmakehä.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Mykoplasmakontaminaatio suljetaan pois sekä PCR-pohjaisilla määrityksillä että luminesenssiin perustuvilla mykoplasman osoitusmenetelmillä.

Bakteeri-, sieni- tai hiivakontaminaation välttämiseksi soluviljelmät tarkastetaan päivittäin silmämääräisesti.

Pitkäaikaissäilytystä varten injektiopullot asetetaan höyryfaasissa olevaan nestemäiseen typpeen noin -150 - -196 °C:een. Säilytys -80 °C:ssa on hyväksyttävää vain lyhyenä välivaiheena ennen siirtoa nestemäiseen typpeen.

Kryosäilytetyt solulinjat kuljetetaan kuivajäässä validoidussa, eristetyssä pakkauksessa, jossa on riittävästi kylmäainetta, jotta lämpötila pysyy noin -78 °C:ssa koko kuljetuksen ajan. Pakkaus on tarkastettava välittömästi sen vastaanottamisen jälkeen ja injektiopullot on siirrettävä viipymättä asianmukaiseen varastoon.

Me Cytionilla seisomme tuotteidemme laadun ja elinkelpoisuuden takana. Takaamme, että solumme ovat elinkelpoisia viljelyn alkaessa 60 päivän ajan sen jälkeen, kun ne on lähetetty laitoksestamme. Vakuutamme, että kaikki materiaalit ovat analyysitodistuksessa ja/tai tuoteselosteessa kuvattujen eritelmien mukaisia

Lisätietoja on <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang="""x-default"">Takuulausumassa