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Celle CESS
Tessuto
Sangue periferico
Malattia
Leucemia mieloide acuta
Sinonimi
Cess

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Celle CESS

Cell line · Codice prodotto 300262

La linea cellulare CESS è una linea cellulare linfoblastoide di tipo B derivata da un paziente affetto da leucemia. Questa linea cellulare è comunemente utilizzata per lo studio delle immunoglobuline...

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01Informazioni generali

Descrizione

La linea cellulare CESS è una linea cellulare linfoblastoide B derivata da un paziente umano affetto da leucemia. Questa linea cellulare è comunemente utilizzata per studiare la produzione di immunoglobuline, in particolare la secrezione di IgG, grazie alla sua forte risposta alla stimolazione con citochine. Le cellule CESS sono trasformate da EBV e presentano marcatori di superficie caratteristici delle cellule B mature, come CD19 e CD38. Esprimono la classe sIgG1 delle immunoglobuline e servono come modello per studiare la differenziazione e la funzione delle cellule B, comprese le risposte immunitarie regolate da citochine come l'interleuchina-6 (IL-6), nota anche come fattore di stimolazione delle cellule B 2 (BSF-2). L'IL-6 svolge un ruolo cruciale nello stimolare la produzione di immunoglobuline nelle cellule CESS, rendendole un modello prezioso per studiare le risposte delle cellule B nella ricerca immunologica.

Inoltre, le cellule CESS sono state fondamentali per gli studi sulla segnalazione cellulare e sull'apoptosi. In particolare, è stato dimostrato che queste cellule producono e rispondono al fattore di crescita nervoso (NGF) attraverso un meccanismo di segnalazione autocrino, esprimendo recettori NGF ad alta e bassa affinità. Il blocco della segnalazione di NGF con anticorpi o inibitori specifici induce l'apoptosi nelle cellule CESS, caratterizzata dalla fosforilazione di Bcl-2 e dall'attivazione della via p38 MAPK. Ciò rende le cellule CESS un modello importante per la comprensione dei meccanismi molecolari della sopravvivenza e dell'apoptosi delle cellule B, in particolare nel contesto della segnalazione di NGF e della sua regolazione delle proteine della famiglia Bcl-2.

Tessuto
Sangue periferico
Malattia
Leucemia mieloide acuta
Applicazioni
Costituzione di linee cellulari di ibridoma T umano
Sinonimi
  • Cess

02Classificazione

Organismo
Umano
Sesso
Maschio
Proprietà di crescita
Sospensione
Livello di biosicurezza
1

03Caratteristiche

Morfologia
Linfoblasto

04Identificatori

Riferimento bibliografico
CESS (numero di catalogo Cytion 300262)
Codice fiscale NCBI
9606
Cellosaurus
CVCL_0209

05Espressione e suscettibilità

Virus
Trasformato da EBV
Prodotti
IL-2 dopo induzione con TRF (fattore di sostituzione delle cellule T)

06Manipolazione e coltura

Terreno di coltura
RPMI 1640, w: 2,0 mM di glutammina stabile, w: 2,0 g/L di NaHCO3 (articolo Cytion numero 820700a)
Atmosfera di incubazione

37°C, 5%CO2, atmosfera umidificata.

Integratori
Integrare il terreno di coltura con il 10% di FBS
Subcoltura
Rimuovere il vecchio terreno dalle cellule aderenti e lavarle con PBS privo di calcio e magnesio. Per le fiasche T25, utilizzare 3-5 ml di PBS e per le fiasche T75, 5-10 ml. Quindi, coprire completamente le cellule con Accutase, utilizzando 1-2 ml per le fiasche T25 e 2,5 ml per le fiasche T75. Lasciare incubare le cellule a temperatura ambiente per 8-10 minuti per staccarle. Dopo l'incubazione, mescolare delicatamente le cellule con 10 ml di terreno per risospenderle, quindi centrifugare a 300xg per 3 minuti. Scartare il surnatante, risospendere le cellule in terreno fresco e trasferirle in nuove fiasche contenenti terreno fresco.
Densità di semina
Si consiglia 1 x 104 cellule/cm2
Rinnovo dei fluidi
da 2 a 3 volte alla settimana
Recupero post-scongelamento
Lasciare che le cellule si riprendano dal processo di congelamento per almeno 48 ore.
Scongelamento e coltura
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Controllo di qualità e crioconservazione

Sterilità

La contaminazione da micoplasma viene esclusa utilizzando sia saggi basati sulla PCR sia metodi di rilevamento del micoplasma basati sulla luminescenza.

Per garantire l'assenza di contaminazione batterica, fungina o da lieviti, le colture cellulari sono sottoposte a ispezioni visive quotidiane.

Terreno di coltura congelato
Come terreno di crioconservazione, utilizziamo un terreno di crescita completo (incluso FBS) + 10% DMSO per un'adeguata vitalità post-scongelamento, o CM-1 (numero di catalogo Cytion 800100), che include osmoprotettori e stabilizzatori metabolici ottimizzati per migliorare il recupero e ridurre lo stress crio-indotto.
Condizioni di conservazione

Per la conservazione a lungo termine, porre le fiale in azoto liquido in fase vapore a una temperatura compresa tra -150 e -196 °C circa. La conservazione a -80 °C è accettabile solo come breve fase intermedia prima del trasferimento in azoto liquido.

Condizioni di spedizione

Le linee cellulari crioconservate vengono spedite su ghiaccio secco in confezioni isolate e convalidate, con una quantità di refrigerante sufficiente a mantenere circa -78 °C durante il trasporto. Al ricevimento, ispezionare immediatamente il contenitore e trasferire immediatamente le fiale in un luogo di conservazione appropriato.

08Donatore

Etnia
Europeo