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Células CESS
Tecido
Sangue periférico
Doença
Leucemia mieloide aguda
Sinónimos
Cess

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Células CESS

Cell line · Número do produto 300262

A linha celular CESS é uma linha celular linfoblastoide B derivada de um doente humano com leucemia. Esta linha celular é frequentemente utilizada para estudar as proteínas de imunoglobulina...

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Personalização / Recomendações

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1

01Informações gerais

Descrição

A linha celular CESS é uma linha celular linfoblastóide B derivada de um doente humano com leucemia. Esta linha celular é normalmente utilizada para estudar a produção de imunoglobulinas, em especial a secreção de IgG, devido à sua forte resposta à estimulação com citocinas. As células CESS são transformadas pelo EBV e apresentam marcadores de superfície caraterísticos das células B maduras, como o CD19 e o CD38. Expressam a classe de imunoglobulinas sIgG1 e servem de modelo para estudar a diferenciação e a função das células B, incluindo as respostas imunitárias reguladas por citocinas como a interleucina-6 (IL-6), também conhecida como fator de estimulação das células B 2 (BSF-2). A IL-6 desempenha um papel crucial na estimulação da produção de imunoglobulinas nas células CESS, tornando-as um modelo valioso para a investigação das respostas das células B na investigação imunológica.

Além disso, as células CESS têm sido fundamentais em estudos centrados na sinalização celular e na apoptose. Nomeadamente, foi demonstrado que estas células produzem e respondem ao Fator de Crescimento Nervoso (NGF) através de um mecanismo de sinalização autócrino, expressando receptores NGF de alta e baixa afinidade. O bloqueio da sinalização do NGF com anticorpos ou inibidores específicos induz a apoptose nas células CESS, caracterizada pela fosforilação do Bcl-2 e pela ativação da via p38 MAPK. Este facto torna as células CESS um modelo importante para a compreensão dos mecanismos moleculares da sobrevivência e apoptose das células B, particularmente no contexto da sinalização NGF e da sua regulação das proteínas da família Bcl-2.

Tecido
Sangue periférico
Doença
Leucemia mieloide aguda
Aplicações
Estabelecimento de linhas celulares de hibridoma T humano
Sinónimos
  • Cess

02Classificação

Organismo
Humano
Sexo
Masculino
Propriedades de crescimento
Suspensão
Nível de biossegurança
1

03Características

Morfologia
Linfoblasto

04Identificadores

Referência
CESS (número de catálogo Cytion 300262)
Número de identificação fiscal do NCBI
9606
Cellosaurus
CVCL_0209

05Expressão e suscetibilidade

Vírus
Transformado pelo EBV
Produtos
IL-2 após indução com TRF (fator de substituição de células T)

06Manuseamento e cultura

Meio de cultura
RPMI 1640, com: 2,0 mM de glutamina estável, com: 2,0 g/L NaHCO3 (número de artigo Cytion 820700a)
Atmosfera de incubação

37°C, 5%CO2, atmosfera humidificada.

Suplementos
Completar o meio com 10% de FBS
Subcultura
Retirar o meio antigo das células aderentes e lavá-las com PBS sem cálcio e magnésio. Nos frascos T25, utilizar 3-5 ml de PBS e nos frascos T75, 5-10 ml. Em seguida, cobrir completamente as células com Accutase, utilizando 1-2 ml para os frascos T25 e 2,5 ml para os frascos T75. Deixar as células incubar à temperatura ambiente durante 8-10 minutos para as destacar. Após a incubação, misturar suavemente as células com 10 ml de meio para as ressuspender e, em seguida, centrifugar a 300xg durante 3 minutos. Deitar fora o sobrenadante, ressuspender as células em meio fresco e transferi-las para novos frascos que já contenham meio fresco.
Densidade de sementeira
Recomenda-se 1 x 104 células/cm2
Renovação de fluidos
2 a 3 vezes por semana
Recuperação após o descongelamento
Deixar as células recuperarem do processo de congelação durante pelo menos 48 horas.
Descongelamento e cultura
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Controlo de qualidade e criopreservação

Esterilidade

A contaminação por micoplasma é excluída utilizando ensaios baseados em PCR e métodos de deteção de micoplasma baseados em luminescência.

Para garantir que não há contaminação bacteriana, fúngica ou de leveduras, as culturas de células são sujeitas a inspecções visuais diárias.

Meio de congelação
Como meio de criopreservação, utilizamos um meio de crescimento completo (incluindo FBS) + 10% DMSO para uma viabilidade pós-descongelamento adequada, ou CM-1 (número de catálogo Cytion 800100), que inclui osmoprotectores optimizados e estabilizadores metabólicos para melhorar a recuperação e reduzir o stress induzido pela crio.
Condições de armazenamento

Para conservação a longo prazo, colocar os frascos em azoto líquido em fase de vapor a uma temperatura entre -150 e -196 °C. O armazenamento a -80 °C é aceitável apenas como um curto passo intermédio antes da transferência para azoto líquido.

Condições de envio

As linhas celulares criopreservadas são expedidas em gelo seco em embalagens validadas e isoladas com refrigerante suficiente para manter aproximadamente -78 °C durante o transporte. Aquando da receção, inspecionar imediatamente o recipiente e transferir sem demora os frascos para um local de armazenamento adequado.

08Doador

Etnia
Europeu