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Human Foreskin Fibroblast Cells (HFFC)
Tessuto
Prepuzio

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Human Foreskin Fibroblast Cells (HFFC)

Cell line · Codice prodotto 300715

Human Foreskin Fibroblast Cells (HFFC) are derived from the fibroblastic tissue of juvenile foreskin. These cells are an essential tool in the study of hu...

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01Informazioni generali

Descrizione

Le cellule fibroblastiche del prepuzio umano (HFFC) derivano dal tessuto fibroblastico del prepuzio giovanile. Queste cellule sono uno strumento essenziale nello studio della biologia umana, in particolare nella ricerca relativa alla guarigione delle ferite, alla biologia della pelle e alla senescenza cellulare. I fibroblasti svolgono un ruolo fondamentale nella sintesi della matrice extracellulare e del collagene, componenti cruciali del tessuto connettivo. Le HFFC sono spesso utilizzate in esperimenti che esplorano i meccanismi di sviluppo della pelle, il rimodellamento dermico e le risposte cellulari a vari fattori di crescita e citochine.

Le HFFC sono caratterizzate dalla loro morfologia a forma di fuso e dalla loro capacità di proliferare rapidamente in vitro, rendendole adatte a varie applicazioni sperimentali, tra cui l'ingegneria tissutale, la medicina rigenerativa e lo screening farmacologico. Queste cellule sono preziose anche negli studi che indagano gli effetti delle radiazioni UV sulle cellule cutanee, la fisiopatologia delle malattie fibrotiche e il processo di invecchiamento della pelle. A causa della loro origine neonatale, le HFFC sono meno soggette ad accumulare mutazioni rispetto ai fibroblasti adulti, il che le rende un modello ideale per lo studio delle funzioni cellulari primarie.

Tessuto
Prepuzio

02Classificazione

Organismo
Umano
Proprietà di crescita
Aderente

03Caratteristiche

Morfologia
Fibroblasti

04Identificatori

Riferimento bibliografico
Cellule di fibroblasti della pelle umana (HFFC) (catalogo Cytion numero 300715)
Codice fiscale NCBI
9606

05Manipolazione e coltura

Terreno di coltura
DMEM:Ham's F12 (1:1), w: 3,1 g/L di glucosio, w: 2,5 mM di L-Glutammina, w: 15 mM di HEPES, w: 0,5 mM di Sodio piruvato, w: 1,2 g/L di NaHCO3 (articolo Cytion numero 820400a)
Atmosfera di incubazione

37°C, 5%CO2, atmosfera umidificata.

Integratori
Integrare il terreno di coltura con 10% FBS, 10 ng/mL bFGF, 10 microgrammi/L di insulina
Reagente di dissociazione
Accutase
Subcoltura
Rimuovere il vecchio terreno dalle cellule aderenti e lavarle con PBS privo di calcio e magnesio. Per le fiasche T25, utilizzare 3-5 ml di PBS e per le fiasche T75, 5-10 ml. Quindi, coprire completamente le cellule con Accutase, utilizzando 1-2 ml per le fiasche T25 e 2,5 ml per le fiasche T75. Lasciare incubare le cellule a temperatura ambiente per 8-10 minuti per staccarle. Dopo l'incubazione, mescolare delicatamente le cellule con 10 ml di terreno per risospenderle, quindi centrifugare a 300xg per 3 minuti. Scartare il surnatante, risospendere le cellule in terreno fresco e trasferirle in nuove fiasche contenenti terreno fresco.
Scongelamento e coltura
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

06Controllo di qualità e crioconservazione

Sterilità

La contaminazione da micoplasma viene esclusa utilizzando sia saggi basati sulla PCR sia metodi di rilevamento del micoplasma basati sulla luminescenza.

Per garantire l'assenza di contaminazione batterica, fungina o da lieviti, le colture cellulari sono sottoposte a ispezioni visive quotidiane.

Terreno di coltura congelato
Come terreno di crioconservazione, utilizziamo FBS al 90% + DMSO al 10% per mantenere la vitalità, oppure CM-1 (Cytion numero di catalogo 800100), che include osmoprotettori e stabilizzatori metabolici ottimizzati per migliorare il recupero e ridurre lo stress crio-indotto.
Condizioni di conservazione

Per la conservazione a lungo termine, porre le fiale in azoto liquido in fase vapore a una temperatura compresa tra -150 e -196 °C circa. La conservazione a -80 °C è accettabile solo come breve fase intermedia prima del trasferimento in azoto liquido.

Condizioni di spedizione

Le linee cellulari crioconservate vengono spedite su ghiaccio secco in confezioni isolate e convalidate, con una quantità di refrigerante sufficiente a mantenere circa -78 °C durante il trasporto. Al ricevimento, ispezionare immediatamente il contenitore e trasferire immediatamente le fiale in un luogo di conservazione appropriato.