Pāriet uz saturu
HROG12 T0 M1
Audums
Smadzenes
Slimība
Glioblastoma

Dokumenti

HROG12 T0 M1

Cell line · Preces numurs 300882

HROG12 T0 M1 ir primārā cilvēka daudzveidīgās glioblastomas (GBM) šūnu līnija, kas izveidota no svaigi izgriezta audzēja audiem pieaugušam pacientam, kuram diagnosticēta ...

€800.00bez nodokļa un piegādes izmaksām
Pēc pasūtījuma
1

01Vispārīga informācija

Apraksts

HROG12 T0 M1 ir primārā cilvēka glioblastoma multiforme (GBM) šūnu līnija, kas izveidota no svaigi izgriezta audzēja audiem pieaugušam pacientam, kuram diagnosticēta IV pakāpes glioblastoma saskaņā ar PVO klasifikāciju. Apzīmējums „T0” norāda, ka paraugs tika iegūts sākotnējā ķirurģiskā iejaukšanās laikā, savukārt „M1” attiecas uz atbilstošo in vitro modeli, kas iegūts no šī primārā audzēja. Šūnu līnija tika izveidota HROG (Hansestadt Rostock Glioma) modeļu platformā, kas koncentrējas uz ultra-zemas pasāžas gliomas kultūru izveidi, kas saglabā pacientam specifiskas molekulārās un bioloģiskās īpašības.

HROG12 T0 M1 parāda adhezīvu augšanu standarta kultivēšanas apstākļos un uzrāda fibroblastu tipisku morfoloģiju, kas ir raksturīga primārajām GBM kultūrām. HROG atvasināto šūnu līniju imunofenotipiskā raksturojuma analīze liecina par neironu un glijas šūnu līnijas marķieru, piemēram, glijas fibrilārā skābā proteīna (GFAP), nestīna un vimentīna, ekspresiju, kas apstiprina astrocitāro audzēja izcelsmi. HROG kolekcijā molekulārā profilēšana ietver klīniski nozīmīgu biomarķieru novērtēšanu, piemēram, MGMT promotora metilāciju, EGFR amplifikācijas statusu un gēnu mutāciju analīzi, tostarp TP53, IDH1/2, KRAS un BRAF, apstiprinot audzējiem saistītu genomisko izmaiņu saglabāšanos agrīnās pasāžas kultūrās.

HROG12 T0 M1 ir izmantots in vitro novērtējumam par terapeitisko reakciju uz standarta glioblastomas ārstēšanu, tostarp alkilējošiem līdzekļiem, kā arī izpētei paredzētām mērķtiecīgām terapijām. Salīdzinošās analīzes starp HROG modeļiem liecina par stabilu morfoloģiju, reproducējamu augšanas kinētiku un konsekventiem zāļu jutības profiliem agrīnās pasāžās. Kā no pacientiem iegūts, zemas pasāžas glioblastomas modelis, HROG12 T0 M1 nodrošina klīniski nozīmīgu platformu augstas pakāpes gliomas audzēja bioloģijas, molekulārās heterogenitātes un terapeitiskās rezistences mehānismu pētīšanai.

Audums
Smadzenes
Slimība
Glioblastoma

02Klasifikācija

Organisms
Cilvēks
Augšanas īpašības
Atbalstītājs
Bioloģiskās drošības līmenis
1

03Identifikatori

Atsauce
HROG12 T0 M1 (Cytion kataloga numurs 300882)
NCBI nodokļu identifikācijas numurs
9606
Cellosaurus
CVCL_B7FR

04Apstrāde un audzēšana

Barotne
DMEM:Ham's F12 (1:1), w: 3,1 g/l glikozes, w: 2,5 mM L-glutamīna, w: 15 mM HEPES, w: 0,5 mM nātrija piruvāta, w: 1,2 g/l NaHCO3 (Cytion izstrādājuma numurs 820400a)
Inkubācijas vide

37°C, 5%CO2, mitrināta atmosfēra.

Papildinājumi
Papildināt barotni ar 10% FBS
Disociācijas reaģents
Accutase
Pārstādīšana
Noņemt veco barotni no pielipušajām šūnām un mazgāt tās ar PBS, kurā nav kalcija un magnija. T25 kolbām izmantojiet 3-5 ml PBS, bet T75 kolbām - 5-10 ml. Pēc tam pilnībā pārklājiet šūnas ar Accutase, izmantojot 1-2 ml T25 kolbām un 2,5 ml T75 kolbām. Ļaujiet šūnām inkubēties istabas temperatūrā 8-10 minūtes, lai tās atdalītos. Pēc inkubācijas uzmanīgi samaisiet šūnas ar 10 ml barotnes, lai tās atkārtoti suspendētu, pēc tam centrifugējiet 3 minūtes ar 300xg. Izmetiet supernatantu, atkārtoti suspendējiet šūnas svaigā barotnē un pārvietojiet tās jaunās kolbās, kurās jau ir svaiga barotne.
Atkausēšana un kultivēšana
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

05Kvalitātes kontrole un kriokonservācija

Sterilitāte

Mikoplazmas piesārņojums tiek izslēgts, izmantojot gan uz PCR balstītus testus, gan uz luminiscenci balstītas mikoplazmas noteikšanas metodes.

Lai pārliecinātos, ka nav baktēriju, sēnīšu vai rauga piesārņojuma, šūnu kultūras katru dienu vizuāli pārbauda.

Saldēšanas barotne
Kā kriokonservēšanas barotni mēs izmantojam 50 % bāzes barotni + 40 % FBS + 10 % DMSO vai CM-1 (Cytion kataloga numurs 800100), kas ietver optimizētus osmoprotektorus un metaboliskos stabilizatorus, lai uzlabotu reģenerāciju un samazinātu krioinducēto stresu.
Uzglabāšanas nosacījumi

Ilgstošai uzglabāšanai flakonus ievietojiet šķidrā slāpeklī ar tvaika fāzi aptuveni -150 līdz -196 °C temperatūrā. Uzglabāšana -80 °C temperatūrā ir pieļaujama tikai kā īss starpposms pirms pārvietošanas uz šķidro slāpekli.

Piegādes nosacījumi

Kriokonservētas šūnu līnijas tiek sūtītas uz sausā ledus apstiprinātā, izolētā iepakojumā ar pietiekamu dzesēšanas šķidruma daudzumu, lai visā transportēšanas laikā uzturētu aptuveni -78 °C temperatūru. Pēc saņemšanas nekavējoties pārbaudiet iepakojumu un nekavējoties pārvietojiet flakonus uz atbilstošu uzglabāšanas vietu.

06Ziedotājs

Etniskā piederība
Kaukāzietis