Pāriet uz saturu
L5178Y TK+/- klons (3.7.2C)
Audums
Thymus
Slimība
Peles timusa limfoma
Sinonīmi
L5178Y TK+/-3.7.2c, TK+/- (clone 3.7.2C)

Dokumenti

L5178Y TK+/- klons (3.7.2C)

Cell line · Preces numurs 305485

Šūnu līnija L5178Y TK+/− Clone 3.7.2C ir peles limfomas modelis, ko plaši izmanto in vitro genotoksicitātes testēšanai, jo īpaši peles limfomas timidīna...

€550.00bez nodokļa un piegādes izmaksām

Pielāgošana / Ieteikumi

Noliktavā
Lot
Ieteicams (jaunākā partija)
  • CoA
1

01Vispārīga informācija

Apraksts

L5178Y TK+/− klons 3.7.2C šūnu līnija ir peles limfomas modelis, ko plaši izmanto in vitro genotoksicitātes testēšanai, jo īpaši peles limfomas timidīna kināzes (TK) gēna mutācijas testā (MLA). Šis klons ir iegūts no vecāku L5178Y šūnu līnijas, kas izveidota no DBA-2 pelēm metilholantrēna izraisītas timusa limfomas. 3.7.2C subklons tika īpaši izstrādāts, lai būtu heterozigots TK lokusā (TK+/−), ļaujot atlasīt TK−/− mutācijas caur heterozigotijas zuduma gadījumiem.

L5178Y TK+/− 3.7.2C šūnas raksturo ātrs populācijas dubultošanās laiks (aptuveni 8–11 stundas) un stabils modālais hromosomu skaits 40. Tām ir sarežģīts kariotips, tostarp Robertsona fūzijas un specifiskas translokācijas. Šajās šūnās ir mutēts p53 gēns, vienam alēlam ir bezjēdzīga mutācija eksonā 4, bet otram — misense mutācija eksonā 5, kas izraisa normālas p53 funkcijas zudumu. Šis ģenētiskais fons palielina to lietderību klastogēnās un mutagēnās iedarbības pētīšanā.

Audums
Thymus
Slimība
Peles timusa limfoma
Sinonīmi
  • L5178Y TK+/-3.7.2c
  • TK+/- (clone 3.7.2C)

02Klasifikācija

Organisms
Pele
Sekss
Sieviete
Augšanas īpašības
Atsperes
Bioloģiskās drošības līmenis
1

03Raksturlielumi

Morfoloģija
Limfoblastiem līdzīgs
Šūnu tips
T šūnas

04Identifikatori

Atsauce
L5178Y TK+/- klons (3.7.2C) (Cytion kataloga numurs 305485)
NCBI nodokļu identifikācijas numurs
10090
Cellosaurus
CVCL_6665

05Apstrāde un audzēšana

Barotne
DMEM, w: 4,5 g/l glikozes, w: 4 mM L-glutamīna, w: 3,7 g/l NaHCO3, w: 1,0 mM nātrija piruvāta (Cytion izstrādājuma numurs 820300a)
Inkubācijas vide

37°C, 5%CO2, mitrināta atmosfēra.

Papildinājumi
Papildiniet barotni ar 10 % FBS un 0,1 % Pluronic F-68
Pārstādīšana
Savāc suspensijas šūnas 15 ml mēģenē un saudzīgi izmazgā pielipušās šūnas ar PBS bez kalcija un magnija (T25 kolbām izmanto 3-5 ml, bet T75 kolbām - 5-10 ml). Uzklājiet Accutase (1-2 ml T25 kolbām, 2,5 ml T75 kolbām), nodrošinot pilnīgu šūnu slāņa pārklājumu. Ļaujiet šūnām inkubēties istabas temperatūrā 10 minūtes. Pēc inkubācijas apvienot un centrifugēt gan suspensiju, gan pielipušās šūnas. Pēc centrifugēšanas uzmanīgi resuspendēt šūnu granulas un pārvietot šūnu suspensiju jaunās kolbās ar svaigu barotni.
Sēšanas blīvums
0,1–2 × 10⁶ šūnu/ml
Šķidruma atjaunošana
2 reizes nedēļā
Atgūšanās pēc atkusņa
Tūlītēja atšķaidīšana 25 ml barotnē (standarts: 8 ml)
Atkausēšana un kultivēšana
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

06Kvalitātes kontrole un kriokonservācija

Sterilitāte

Mikoplazmas piesārņojums tiek izslēgts, izmantojot gan uz PCR balstītus testus, gan uz luminiscenci balstītas mikoplazmas noteikšanas metodes.

Lai pārliecinātos, ka nav baktēriju, sēnīšu vai rauga piesārņojuma, šūnu kultūras katru dienu vizuāli pārbauda.

Saldēšanas barotne
Kā kriokonservācijas vidi mēs izmantojam 95 % (tilp.) FBS + 5 % (tilp.) DMSO + 0,1 % Pluronic F-68, lai nodrošinātu pietiekamu dzīvotspēju pēc atkausēšanas, vai arī CM-1 (Cytion kataloga numurs 800100), kas satur optimizētus osmotiskos aizsarglīdzekļus un vielmaiņas stabilizatorus, lai uzlabotu atjaunošanos un mazinātu kriogēnisko stresu.
Uzglabāšanas nosacījumi

Ilgstošai uzglabāšanai flakonus ievietojiet šķidrā slāpeklī ar tvaika fāzi aptuveni -150 līdz -196 °C temperatūrā. Uzglabāšana -80 °C temperatūrā ir pieļaujama tikai kā īss starpposms pirms pārvietošanas uz šķidro slāpekli.

Piegādes nosacījumi

Kriokonservētas šūnu līnijas tiek sūtītas uz sausā ledus apstiprinātā, izolētā iepakojumā ar pietiekamu dzesēšanas šķidruma daudzumu, lai visā transportēšanas laikā uzturētu aptuveni -78 °C temperatūru. Pēc saņemšanas nekavējoties pārbaudiet iepakojumu un nekavējoties pārvietojiet flakonus uz atbilstošu uzglabāšanas vietu.

07Ziedotājs

Šķirne / pasuga
DBA/2
Donora vecums
8 mēneši