Pāriet uz saturu
LS513
Audums
Kolorektālais
Slimība
Adenokarcinoma
Sinonīmi
LS513, LS 513

Dokumenti

LS513

Cell line · Preces numurs 300457

The LS513 cell line is a well-characterized colorectal carcinoma model derived from a primary tumor biopsy taken in 1985 from a 63-year-old Caucasian male...

€650.00bez nodokļa un piegādes izmaksām
Noliktavā
Lot
Ieteicams (jaunākā partija)
  • CoA
1

01Vispārīga informācija

Apraksts

LS513 šūnu līnija ir labi raksturots kolorektālā karcinoma modelis, kas iegūts no primārā audzēja biopsijas, kas 1985. gadā veikta 63 gadus vecam kaukāziešu izcelsmes vīriešu pacientam. Audzējs tika klasificēts kā Dukes C mucīnu izdalījošs cēkuma karcinoma, kas atrodas Bauhina vārstulī. LS513 šūnas ir adhezīvas un ir parādījušas daudzveidīgu rezistenci pret zālēm (MDR), kas padara tās par vērtīgu modeli kolorektālā vēža zāļu rezistences mehānismu pētīšanai. Šīs šūnas metilcelulozē parāda 30 % koloniju veidošanas efektivitāti un ir tumorogēnas kailām pelēm, kas vēl vairāk apstiprina to lietošanu onkogēnos pētījumos.

Ģenētiskā līmenī LS513 šūnas izpauž vairākas ievērojamas īpašības. Tās ir pozitīvas attiecībā uz p53 savvaļas tipa onkogēnu un izpauž karcinoembrionālo antigēnu (CEA) aptuveni 50 % šūnu. Turklāt LS513 šūnas izpauž galvenā histosaderības kompleksa (MHC) I klases antigēnus, tostarp HLA un beta 2 mikroglobulīnu, bet tām trūkst MHC II klases antigēnu (HLA-DR, DQ un DP). Šūnas ražo arī transformējošo augšanas faktoru beta 1 (TGF beta-1) ar ātrumu 83 pg uz 106 šūnām 24 stundās. Jāatzīmē, ka TGF beta-1 darbojas kā LS513 šūnu proliferācijas inhibitors, bet TGF beta-2 nav nozīmīgas ietekmes uz to augšanu. Salīdzinot ar LS1034 šūnu līniju, LS513 šūnas ir 100 reizes mazāk jutīgas pret TGF beta-1, kas norāda uz atšķirīgām reakcijām uz augšanas faktora signāliem starp šiem diviem kolorektālā karcinoma modeļiem.

LS513 šūnas uzrāda unikālu antigēnu ekspresijas profilu, ar spēcīgu pozitīvumu starpšūnu adhezijas molekulai 1 (ICAM-1) un HLA I klases antigēniem. Īpaši jāatzīmē MHC II klases antigēnu ekspresijas trūkums, jo tas liecina par potenciāliem imūnsistēmas izvairīšanās mehānismiem, kas varētu būt saistīti ar kolorektālā vēža progresēšanu un metastāzēm. Šīs īpašības, kopā ar rezistenci pret vairākiem medikamentiem un spēju veidot audzējus imūndeficītiem pelēm, padara LS513 šūnas par spēcīgu instrumentu kolorektālā vēža molekulāro un šūnu pamatu izpētei, īpaši imūnsistēmas mijiedarbības un terapeitiskās rezistences kontekstā.

Audums
Kolorektālais
Slimība
Adenokarcinoma
Sinonīmi
  • LS513
  • LS 513

02Klasifikācija

Organisms
Cilvēks
Sekss
Vīrietis
Augšanas īpašības
Atbalstītājs
Bioloģiskās drošības līmenis
1

03Raksturlielumi

Morfoloģija
Epitēlijveidīgs
Tumorogēns
Jā, veido audzējus kailām pelēm
Kariotips
Var izdalīt divas stumbra līnijas. Galvenā bija pārstāvēta 65 % šūnu ar modālo skaitu 51,xY un 3 marķieriem: M1 - der(1)t(1,15), M2 - der(2)t(2,3)der(3)t(2,3), M3 un monosomija 15. Otrajai cilmes līnijai bija modāls hromosomu skaits 52,xY, un tai bija M2 un M3, kā arī izohromosoma 1. hromosomas garajam atzaram, ko sauc par M4. Visās analizētajās šūnās bija trisomija 5,7, tetrasomija 13 un monosomija 2 un 3, bet līnijā nebija monosomijas 15.

04Identifikatori

Atsauce
LS513 (Cytion kataloga numurs 300457)
NCBI nodokļu identifikācijas numurs
9606
Cellosaurus
CVCL_1386

05Pazīmes un uzņēmība

Proteīnu ekspresija
CEA+ (50%), p53+
Antigēna ekspresija
Karcinoembrionālais antigēns (CEA), ICAM-1, HLA I klases pozitīvs
Produkti
Transformējošais augšanas faktors beta 1 (TGF beta-1, 83 pg uz 10 eksp6 šūnām 24 stundās)

06Apstrāde un audzēšana

Barotne
DMEM:Ham's F12 (1:1), w: 3,1 g/l glikozes, w: 2,5 mM L-glutamīna, w: 15 mM HEPES, w: 0,5 mM nātrija piruvāta, w: 1,2 g/l NaHCO3 (Cytion izstrādājuma numurs 820400a)
Inkubācijas vide

37°C, 5%CO2, mitrināta atmosfēra.

Papildinājumi
Papildināt barotni ar 10% FBS
Disociācijas reaģents
Accutase
Pārstādīšana
Noņemt veco barotni no pielipušajām šūnām un mazgāt tās ar PBS, kurā nav kalcija un magnija. T25 kolbām izmantojiet 3-5 ml PBS, bet T75 kolbām - 5-10 ml. Pēc tam pilnībā pārklājiet šūnas ar Accutase, izmantojot 1-2 ml T25 kolbām un 2,5 ml T75 kolbām. Ļaujiet šūnām inkubēties istabas temperatūrā 8-10 minūtes, lai tās atdalītos. Pēc inkubācijas uzmanīgi samaisiet šūnas ar 10 ml barotnes, lai tās atkārtoti suspendētu, pēc tam centrifugējiet 3 minūtes ar 300xg. Izmetiet supernatantu, atkārtoti suspendējiet šūnas svaigā barotnē un pārvietojiet tās jaunās kolbās, kurās jau ir svaiga barotne.
Sēšanas blīvums
1 x 104 šūnas/cm2
Šķidruma atjaunošana
Ik pēc 3 dienām
Atgūšanās pēc atkusņa
Pēc atkausēšanas izkliedējiet šūnas uz šķīvja ar blīvumu 5 x 104 šūnas/cm2 un ļaujiet šūnām atgūties no sasaldēšanas procesa un pielipt vismaz 24 stundas.
Atkausēšana un kultivēšana
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kvalitātes kontrole un kriokonservācija

Sterilitāte

Mikoplazmas piesārņojums tiek izslēgts, izmantojot gan uz PCR balstītus testus, gan uz luminiscenci balstītas mikoplazmas noteikšanas metodes.

Lai pārliecinātos, ka nav baktēriju, sēnīšu vai rauga piesārņojuma, šūnu kultūras katru dienu vizuāli pārbauda.

Saldēšanas barotne
Kā kriokonservēšanas barotni mēs izmantojam pilnvērtīgu augšanas barotni (ieskaitot FBS) + 10 % DMSO, lai nodrošinātu pietiekamu dzīvotspēju pēc atkausēšanas, vai CM-1 (Cytion kataloga numurs 800100), kas ietver optimizētus osmoprotektorus un metaboliskos stabilizatorus, lai uzlabotu atveseļošanos un samazinātu krioinducēto stresu.
Uzglabāšanas nosacījumi

Ilgstošai uzglabāšanai flakonus ievietojiet šķidrā slāpeklī ar tvaika fāzi aptuveni -150 līdz -196 °C temperatūrā. Uzglabāšana -80 °C temperatūrā ir pieļaujama tikai kā īss starpposms pirms pārvietošanas uz šķidro slāpekli.

Piegādes nosacījumi

Kriokonservētas šūnu līnijas tiek sūtītas uz sausā ledus apstiprinātā, izolētā iepakojumā ar pietiekamu dzesēšanas šķidruma daudzumu, lai visā transportēšanas laikā uzturētu aptuveni -78 °C temperatūru. Pēc saņemšanas nekavējoties pārbaudiet iepakojumu un nekavējoties pārvietojiet flakonus uz atbilstošu uzglabāšanas vietu.

08Ziedotājs

Donora vecums
63 gadi
Etniskā piederība
Kaukāzietis